【摘 要】
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目的探讨低氧条件下内皮含PAS结构域蛋白1（EPAS1）调控人红白血病细胞K562细胞红系分化的作用及机制。方法1.K562常氧/低氧红系诱导及检测:常氧（20%O2）和低氧（5%O2）条件下使用诱导剂氯化血红素、阿糖胞苷诱导K562细胞向红系分化（常氧诱导组,常氧对照组,低氧诱导组,低氧对照组）,应用流式细胞术检测红系表面标志物CD71/CD235a表达,CCK-8法检测细胞增殖水平,联苯胺染色
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目的探讨低氧条件下内皮含PAS结构域蛋白1（EPAS1）调控人红白血病细胞K562细胞红系分化的作用及机制。方法1.K562常氧/低氧红系诱导及检测:常氧（20%O2）和低氧（5%O2）条件下使用诱导剂氯化血红素、阿糖胞苷诱导K562细胞向红系分化（常氧诱导组,常氧对照组,低氧诱导组,低氧对照组）,应用流式细胞术检测红系表面标志物CD71/CD235a表达,CCK-8法检测细胞增殖水平,联苯胺染色检测血红蛋白合成、q PCR和Western blot检测EPAS1和红系分化相关基因、蛋白表达,分析红系分化情况。2.慢病毒转染:通过慢病毒转染获得稳定敲低EPAS1基因的K562细胞（sh-EPAS1组）和对照组细胞（sh-cont组,转染空载病毒）,收集转染后细胞进行常氧/低氧红系诱导分化（常氧sh-EPAS1组,常氧sh-cont组,低氧sh-EPAS1组,低氧sh-cont组）,通过上述方法检测抑制EPAS1后K562红系分化水平的变化。3.统计学方法:应用SPSS19.0软件进行数据处理,符合正态分布的数据均以均数±标准差（χ±SD）表示。多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）,两组间比较采用LSD检验,P＜0.05为差异有统计学意义。结果1.低氧对照组CD235a+CD71+细胞比例显著升高[低氧对照组（43.40±1.25%）vs.常氧对照组（34.60±1.18%）,n=3,P＜0.05],低氧诱导组CD235a+CD71+细胞比例较常氧诱导组显著提高[低氧诱导组（82.73±1.68%）vs.常氧诱导组（49.73±2.10%）,n=3,P＜0.05]。敲低EPAS1后,经低氧sh-EPAS1组CD235a+CD71+细胞比例低于低氧sh-cont组[低氧sh-EPAS1组（31.36±1.45%）vs.低氧sh-cont组（76.43±2.91%）,n=3,P＜0.05]。2.低氧诱导组联苯胺染色阳性细胞百分比显著高于常氧诱导组[低氧诱导组（46.43±1.60%）vs.常氧诱导组（19.20±1.41%）,n=3,P＜0.05],敲低EPAS1后,低氧sh-EPAS1组联苯胺染色阳性率明显下降,[低氧sh-cont组（31.52±1.30%）vs.低氧sh-EPAS1组（19.03±2.01%）,n=3,P＜0.05]。3.敲低EPAS1后,常氧/及低氧sh-EPAS1组细胞增殖水平均明显低于常氧/低氧sh-cont组（P＜0.05）。4.低氧显著促进K562细胞表达EPAS1、CD235a、γ-globin基因和蛋白（P＜0.05）。敲低EPAS1后,K562细胞CD235a、γ-globin基因和蛋白表达下降（P＜0.05）。5.低氧显著促进K562细胞表达IRS2基因和蛋白（P＜0.05）,敲低EPAS1后K562细胞IRS2表达降低（P＜0.05）,抑制IRS2使细胞CD235a+CD71+细胞比例下降,CD235a、γ-globin基因表达降低,细胞红系分化受阻。结论（1）低氧可以上调K562细胞EPAS1表达水平,促进细胞向红系分化,低氧下诱导K562细胞可明显提高其红系分化程度。（2）敲低EPAS1抑制常氧及低氧下K562细胞向红系诱导分化,EPAS1是调控K562细胞红系分化的重要因子。（3）低氧可上调K562细胞IRS2表达,IRS2水平受EPAS1正向调控,EPAS1可通过调控IRS2水平介导K562红系分化。
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