前言 肿瘤的发生、发展与细胞周期控制的分子机制联系紧密。对细胞周期调控的研究使人们认识到其核心是细胞周期蛋白激酶（cyclin dependent kinases，CDKs）的时相性激活，它们通过对相应底物磷酸化，趋使着细胞完成细胞周期。这些蛋白激酶的时相性激活，依赖于一类呈细胞周期特异性表达，累积与分解的蛋白质，称之为细胞周期素（cyclins）。cyclins的时相起伏（即细胞周期特异性的cyclins合成与降解）是细胞周期正常运行的基本前提。cyclin E（细胞周期素E）是细胞G₁周期素之一，在细胞增殖方面起着重要作用；细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）是最重要的细胞周期蛋白之一；二者是细胞周期中G₁和S期重要的调节因子，其异常表达与肿瘤的发生发展关系密切。Ki-67是存在于恶性和正常增殖细胞核内的一种非组织蛋白，由分子量为395Kd和345Kd的二条多肽链组成，为细胞增殖相关抗原，在细胞增殖期表达，静止期不表达，可用来反映肿瘤细胞的增殖活性。我们采用免疫组化方法检测了50例白血病病人骨髓（急性40例，慢性10例）cyclinE、CDK2和Ki-67的表达情况，同时结合临床资料进行分析，以探讨cyclinE、CDK2和Ki-67的异常表达在白血病发生发展和复发过程中的作用。 实验材料 收集1998年1月至2003年1月中国医科大学附属第一医院血液门诊及住院的50例白血病病人骨髓涂片标本，男31例，女19例，年龄15～70岁，中位年龄40.3岁。其中急性非淋巴细胞白血病（ANLL）22例（M₁ 1例，M₂ 4例，M₃ 4例，M₄ 2例，M₅ 6例，M₆ 3例，M₇ 2例），急性淋巴细胞白血病（ALL）18例（L₁ 1例，L₂ 15例，L₃ 2例），慢性粒细胞白血病慢性期（CML）10例，所有病例均符合血液病诊断及疗效标准。50例病人均于化疗前取肝素抗凝的骨髓液0.2～0.3ml，用Ficoll（相对密度1.077）分离（2000r／min，20 min）单个核细胞，离心涂片机制片，一20oC保存，所选用病人标本的白血病细胞数均>90%。对照组为10例正常骨髓。 试剂:免疫组化染色采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶连接法（SP法），一抗:鼠抗人CDKZ单克隆抗体（工作浓度为1:2（X）），鼠抗人c界儿正单克隆抗体、鼠抗人儿价单克隆抗体（即用型），S一P试剂盒。实验方法 S一P免疫组化染色:每张涂片先用冷丙酮固定，0.5%即一40室温打孔，分别加一抗cyclinE、CDKZ（工作浓度为1:200）、儿习鼠抗人单克隆抗体，4“C过夜，再分别加生物素标记的第二抗体（试剂C）、链霉菌抗生物素一过氧化酶溶液（试剂D）室温孵育，每步骤间均用PBS液冲洗，新鲜配置的DAB溶液显色，自来水冲洗，苏木素复染，自然晾干，封片。以PBS代替一抗做阴性对照，卵巢癌细胞系OVCAR3做为cyc坛正的阳性对照，乳腺癌细胞系MCF一分别做CDKZ和‘价的阳性对照。结果判定:叮d初丑、CDKZ、Ki石7阳性反应均为白血病细胞核中出现棕黄色颗粒。光镜下记数400个细胞，计算阳性细胞百分率，阳性细胞)巧%为阳性病例。应用的统计方法包括:应用SPSslO.0统计软件进行列联表XZ检验及秩和相关分析。实验结果 一、cychnE、cDKZ和‘石7在正常人和白血病病人中的表达 50例白血病病人中cyclinE、CDKZ和儿价的阳性表达率分别为3 8 .0%（19乃。）、64.0%（32/5o）和16.0%（8/50）。正常对照者中未检测到cyclinE和凡石7表达，CDKZ的阳性表达率为20.0%（万10）。cyd初区和CDKZ的阳性表达率均明显高于正常对照组（P<0.05）;乙价阳性表达率与正常对照组比较无显著差异（P>0 .05）。CDKZ阳性表达率在CML中最高，ALL中最低，且差异显著（P<0.01）;cyelil正和瓦价在AllJ、ANLL及CML中的表达无差异（P>0.05）。 二、。yclinE、cDKZ和‘价表达和复发的关系 cyclinE、CDKZ和‘石7在白血病复发者中的阳性表达率分别为印.0%（9/巧）口3.3%（11/巧）和6.7%（1/15），初治者中的阳性表达率分别为5.3%（1/19）、52.6%（10/19）和10.5%（万19）。在复发与初治两组病人中，勺d初区的阳性表达率差异显著（P<0.01），CDKZ和l习的阳性表达率无差异（P>0.05）。相关分析显示周阳坛正与白血病复发呈正相关（r七a卜son列联系数为0.53，P<0.05），CDKZ及L笼汀与白血病复发无相关性（R翻圈扭列联系数分别为0.23和0.22，P>0.05）。 三、灯d劝丑、CDKZ和石石7三者间的关系 50例白血病病人同时检讨叮d加E、CDKZ和苟笼刃的表达，cy山uE与CDKZ、CDKZ与‘价、叮d油￡与‘价共表达率分别为32.0%（16/50）、16.0%（8/50）、10.0%（5/50）。cy日i.E和CDKZ共同阳性表达率在复发与初治者中分别为46 .7%（7/巧）和5.3%（1/l9），二者差异显著（P<0.01）。相关分析显示勺山止与CDKZ、CDKZ与石价密切正相关（B圈m刃n列联系数均为0.31，P<0.05），勺d加E与儿笼刃无相关性（R细叫犯列联系数为0.21，P>0.05）。讨论 cyc肠正和CDKZ是细胞周期重要调控因子，主要作用于q期和S期，是DNA复制的重要启动因子，其表达异常可使细胞周期调节失控，增殖分裂加速。儿笼刃是一种与细胞周期密切相关的特异性抗原，可用来反映肿瘤细胞的增殖活性。 五面等及反uded等研究显示勺d初区参与白血病的