青刺果总黄酮的提取工艺及其对糖尿病小鼠降血糖效应的研究

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糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种严重危害人民健康的慢性疾病,以高血糖代谢为特征,持续高血糖带来氧化应激增加,引起各种慢性并发症。已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后的重大流行病之一。因此寻找治疗糖尿病新药,特别是寻找对糖尿病引起的并发症有显著疗效的天然药物,已成为防治糖尿病的当务之急。其中,天然黄酮类化合物独特的药理方式和良好的疗效,已成为降血糖新药开发和研究的热点之一。青刺果(Prinsepia Utilis Royle)为蔷薇科扁核木属植物总花扁核的果实,文献报道青刺果油具有辅助降血脂和降血糖作用,而未见青刺果中黄酮成分的降血糖作用报道。为了给防治糖尿病寻找新的黄酮资源,本研究对青刺果总黄酮(Total flavonoids from Prinsepia utilis Royle,FPR)的提取工艺、定性鉴定和含量测定方法进行了探讨,以便得到青刺果总黄酮最佳的提取工艺;为了探讨其降血糖作用,进行了动物降血糖试验,观察了其对糖尿病小鼠的血糖(Blood Glucose,GLU)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC);甘油三酯(triglyceride,TG);极低密度脂蛋白(Very Low DensityLipoprotein Vholesterol,VLDL-C),谷丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,ALT),天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase,AST)和尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)等指标的影响;通过观察其对糖尿病小鼠心、肝、肺、肾脏器组织的保护作用,初步探讨了其对糖尿病所致并发症的疗效。主要研究结果如下:1.研究青刺果总黄酮的提取工艺和含量。本研究运用有机溶剂萃取法、碱溶酸沉法及结晶法探讨了青刺果总黄酮的提取工艺,并以芦丁为对照品,采用颜色反应和薄层层析对青刺果总黄酮进行理化鉴别,用紫外分光光度法测定含量。结果表明与有机溶剂萃取法、碱溶酸沉法比较,以结晶法制备青刺果总黄酮效果较好,总黄酮含量为33.6%。2.本试验采取腹腔注射四氧嘧啶-Alloxan,ALX(200 mg/kg)建立糖尿病小鼠模型,造模成功后,将糖尿病模型小鼠随机分为:模型对照组(Diabetes mellitus group,DM)组(不治疗组),阿卡波糖治疗组(Acarbose group,AR)组(20 mg/kg)(阳性药物治疗组),青刺果总黄酮治疗组(Total flavonoids from Prinsepia utilis Royle group,FPR)组(300 mg/kg),同时另设一个正常组(Normal control group,NC组),治疗组每天灌胃给药一次,模型对照组和正常组每天灌胃生理盐水一次。于试验后第2周和第4周末空腹采血测GLU,TC,TG,VLDL-C,ALT,AST和BUN等指标。结果表明:与模型对照组相比:青刺果总黄酮能极显著降低GLU,TG和AST水平(P<0.01),能显著降低VLDL-C,ALT和BUN水平(P<0.05)。3.为探讨青刺果总黄酮对糖尿病小鼠所致并发症的疗效,本研究于试验的第2周和4周末,处死部分小鼠,取心、肝、肺、肾,部分组织用于制作石蜡切片,HE(Hematoxylin and Eosin)或Gomori或PAS(Periodic acid Schiff)染色,光镜观察其变化;4周末的部分肾组织用于制作超薄切片,电镜观察其变化。结果如下:与模型对照组相比,青刺果总黄酮治疗组各器官的病理变化都相对较轻,具体表现为:光镜下,心肌纤维纵横纹较清楚,心肌纤维嗜酸性变减轻;肝脏指数显著降低,肝细胞索状结构清楚,肝细胞呈轻微的颗粒变性;肺泡腔增大,肺泡壁基本恢复正常,肺间质、支气管周围有少量的网状纤维和胶原纤维,肺出血得到缓解;肾脏指数极显著降低(P<0.01),肾小球体积较小,系膜细胞相对减少,肾小球基底膜无明显增厚,间质少量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞基本恢复正常,肾小管内糖原沉积减少,肾小管间质网状纤维和胶原纤维含量减少。电镜下,肾小管上皮细胞线粒体基本恢复正常,足细胞突起排列整齐。由此可见,青刺果总黄酮能减轻糖尿病小鼠心肌、肝脏、肺脏和肾脏的病理变化,对糖尿病小鼠心、肝、肺、肾具有保护作用。
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