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目的：研究大黄素对人宫颈癌细胞HeLa增殖的抑制作用及作用机制。方法：以人宫颈癌细胞HeLa为研究系统。给予一定浓度的大黄素后,通过以下实验来检测其对人宫颈癌细胞HeLa增殖的抑制作用及作用机制。1.MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)检测大黄素在不同浓度,不同时间点情况下对HeLa细胞增殖的抑制作用,并初步筛选出有效的抑制浓度。2.TUNEL染色法(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法)和Hoechst33342染色法初步检测大黄素诱导人宫颈癌细胞HeLa凋亡的作用。3.FCM法(流式细胞分选)中利用AnnexinV-FITC和PI定量检测大黄素诱导HeLa细胞凋亡的作用。4.Trizol法提取HeLa细胞的总RNA,逆转录合成CDNA,然后利用Real-time PCR法定量检测凋亡基因Caspase-9、-8、和-3的mRNA表达水平。5.提取HeLa细胞的蛋白质,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白Cytochome c.Apaf-1、Fas、 FasL、FADD、Pro-caspase-9、Pro-caspase-8和Pro-caspase-3的蛋白表达水平。结果：1.细胞培养的结果显示空白组的细胞显示出典型的多边形和鹅卵形的细胞,胞体丰满,边缘清晰,而大黄素处理的人宫颈癌细胞HeLa,在倒置显微镜下观察,可以看到细胞边缘变钝,出现很多皱缩和细小的碎片,证明大黄素对于人宫颈癌细胞HeLa的生长具有毒性作用。2.在孵育了不同浓度的大黄素(0、10、20、30、40和50μM)后,于不同时间点(24、48、72h)采用MTT法检测得到细胞的相对活力分别为100、97、85、74、61和52%；100、94、75、59、46和31%；100、87、66、44、32和16%。说明大黄素能够浓度-时间依赖性的抑制人宫颈癌细胞HeLa的增殖。3.大黄素能够浓度依赖性的诱导人宫颈癌细胞HeLa的凋亡。在孵育了浓度为0、20、40和80μM的大黄素48h后,TUNEL染色和Hoechst33342染色均显示,细胞凋亡的程度呈剂量依赖性的增加；在孵育了浓度为0、20、40和80μM的大黄素48h后,FCM检测显示,早期凋亡和晚期凋亡的HeLa细胞总数逐渐增加,分别为0.8、8.2、22.1和43.7%,说明大黄素能够浓度依赖性的诱导人宫颈癌细胞HeLa的凋亡。4.Real-timePCR结果显示,随着大黄素浓度的增加(0、20、40和80μM),凋亡相关基因Caspase-9、-8.和-3的1mRNA的表达量逐渐增加。5.Western blot结果显示,随着浓度的增加(0、20、40和80μM),大黄素能够剂量依赖性的增加Cytochome c.Apaf-1、Fas、FasL和FADD的蛋白表达水平,但是降低Pro-caspase-9、Pro-caspase-8和Pro-caspase-3的蛋白表达水平。以上结果说明,大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导细胞凋亡从而抑制了人宫颈癌Hela细胞的增殖。结论：体外细胞试验表明,大黄素能够抑制人宫颈癌细胞HeLa的增殖,并且具有浓度-时间依赖性；这种抑制作用主要是通过诱导HeLa细胞凋亡来实现的；大黄素诱导HeLa细胞凋亡主要是通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径实现的。