凉粉草中迷迭香酸的提取及其对宠物犬肠道致病菌的作用研究

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本文主要以中药凉粉草为研究对象,提取酚酸类化合物中的迷迭香酸,采用正交法优化凉粉草中迷迭香酸的提取工艺;采集临床中自然发病宠物犬的肛拭子进行细菌分离鉴定及耐药基因型检测;采用二倍微量稀释法测定凉粉草粗提物及抗菌药物对宠物犬肠道菌的最小抑菌浓度;采用微量棋盘稀释法测定凉粉草粗提物与抗菌药物联合对宠物犬肠道菌的抑菌效果;通过测定碱性磷酸酶(AKP)活性、可溶性蛋白浓度、总蛋白合成量及核苷酸泄漏试验来研究凉粉草粗提物对宠物犬肠道菌的抑菌机理;检测宠物犬肠道菌中的毒力因子,通过宠物犬肠道菌进行诱导小鼠疾病模型,确定半数致死浓度,观察小鼠症状、血常规及通过病理切片观察凉粉草粗提物对其模型的重要器官作用情况,试验主要结果如下:1、优化提取工艺首先要进行单因素试验,运用SPSS设计正交表进行试验,最终优化工艺为:乙醇40%、料液比1:10,超声功率250 W,时间45 min得到16.7%的最大提取率。2、对广西大学动物医院自然发病犬进行肛拭子采集,最终鉴定为变形杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌。其中变形杆菌含有SHV型,大肠杆菌含有SHV型和耐磷霉素的fosA3型,为多重耐药菌及产ESBLs菌株。3、凉粉草粗提物对变形杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌的MIC分别为7.8mg/L、125mg/L、500mg/L,且与抗菌药物联合作用于这三种细菌表现出协同或相加的结果。4、凉粉草粗提物使细胞壁或细胞膜通透性增加,细胞质外渗,菌液中AKP含量、可溶性蛋白含量增多、核苷酸泄漏、抑制细菌核酸合成和细菌蛋白质的合成对大肠杆菌的细胞膜和细胞壁的起到破坏作用。5、采用PCR技术对大肠杆菌毒力基因分析,共检测出4个毒力基因,分别为marA、csgA、sodA和Iss1;小鼠模型组均出现不同程度的感染状况,与空白组相比红细胞和血红蛋白指标具有统计学意义(P<0.05);从病理切片可以看出模型组脾脏出血,肝脏出现炎性细胞、淤血和细胞空化等病理变化,凉粉草粗提物治疗后对比模型组淤血较轻,对脾脏及肝脏有一定的保护作用。
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