大鼠肌肉卫星细胞的分离培养鉴定与诱导分化

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骨骼肌肌肉控制着脊椎动物的精确的运动。成体骨骼肌的组成单元是肌纤维。肌纤维是由一群处于有丝分裂间期的成肌细胞组成的合胞体。而未分化的肌肉卫星细胞参与了合胞体的修复和维持。肌肉卫星细胞是未分化的单核肌源性细胞群落,在哺乳动物、爬行动物、鸟类、两栖动物的骨骼肌内都能发现。1961年在蛙的肌肉中首先发现了卫星细胞的存在。电镜观察提示卫星细胞位于骨骼肌纤维的肌细胞膜与基底膜之间,其核较大、胞浆少,细胞器数量少。这些特征说明卫星细胞处于有丝分裂静止期,其转录活性低于肌纤维。由于能够从病人骨骼肌中获得并在体外大量扩增,肌肉卫星细胞可以作为细胞移植的资源,并且已经应用于骨骼肌和心肌的重建。尽管发现卫星细胞的存在已经有50多年的历史了,但分离鉴定肌肉卫星细胞的方法仍然具有不稳定性。本研究使用两步酶消化和差速贴壁相结合的方法分离大鼠肌肉卫星细胞。Desmin免疫细胞化学染色、Myf5及Myodl的RT-PCR法证明了所分离的细胞是肌肉卫星细胞。成肌和成脂诱导试验证明了所分离的肌肉卫星细胞具有多分化潜能。主要研究结果如下:1.通过两步酶消化和差速贴壁相结合的方法分离得到了肌肉细胞系。Desmin免疫细胞化学染色、Myf5及Myodl的RT-PCR法证明了所分离的细胞是肌肉卫星细胞。2.分离得到的肌肉卫星细胞能够向成肌细胞和脂肪细胞分化的潜能,具有一定的多能性。3. DCA处理促进了肌肉卫星细胞的增殖并激活了WNT/beta-Catenin信号通路。
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