本研究以‘大五星’(红肉)和“川农1-5-9”(白肉)枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)不同发育阶段枇杷果实果皮、果肉为材料,采用同源克隆法获得类胡萝卜素积累过程中关键酶基因——PSY和CYCB,并将获得的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,再利用qRT-PCR从转录水平上检测两种枇杷不同发育阶段基因表达水平。本研究还利用VIGS技术分别干扰‘早钟6号’枇杷果实中PSY、CYCB基因的表达,并分析沉默后类胡萝卜素代谢途径中相关基因的表达情况,探究PSY、CYCB基因在枇杷果实类胡萝卜素积累过程中的调控作用。研究结果如下:1、同源克隆获得了PSY、CYCB基因cDNA序列全长,分别具有一个1 191 bp和1 491 bp的完整的开放阅读框,推导出氨基酸396和496个。不同品种(系)间的PSY、CYCB序列比对发现,序列间具有很高的相似性,都仅有1个氨基酸的差异。氨基酸同源性分析表明,枇杷PSY、CYCB蛋白分别与其他物种具有很高的相似性,可能具有相似的生理特征和形态特征。2、qRT-PCR分析表明,随着枇杷果实的发育,PSY、CYCB基因表达量明显增加,与转色期后枇杷总类胡萝卜素含量变化一致,表明PSY、CYCB基因与枇杷果实类胡萝卜素积累密切相关。3、分别干扰枇杷PSY、CYCB基因表达后,阴性对照果实侵染部位均着黄色,而沉默果实侵染部位均着绿色,且阴性对照和沉默组果肉中均检测到TRV病毒分子。PSY基因沉默后,PSY基因表达量降低55.6%,总类胡萝卜素含量降低46.8%,除CRTISO、LCYB基因外,其他相关基因协同响应PSY基因表达下调;CYCB基因沉默后,CYCB基因表达量降低35.2%,总类胡萝卜素含量降低了44.1%,除PDS、ZDS、BCH基因外,其他相关基因协同响应CYCB基因表达下调。结果表明PSY、CYCB基因对枇杷果实类胡萝卜素积累均起着正调控作用,类胡萝卜素代谢途径中多基因协同响应PSY、CYCB基因表达下调。