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研究目的1.通过分析妊娠早期孕妇与育龄期未孕女性病史、临床症状及阴道分泌物检查结果,探讨妊娠早期阴道炎的发病情况;2.分别应用ITS rDNA及16S rDNA扩增子测序技术对妊娠早期及育龄期未孕女性阴道炎患者阴道分泌物进行菌群多样性分析,探讨两组之间菌群分布的差异性;3.通过对妊娠早期念珠菌性阴道炎患者阴道菌群分布特点的分析,为妊娠早期念珠菌性阴道炎患者诊断和治疗提供新的思路。研究方法第一部分妊娠早期妇女阴道炎发病情况分析1.实验对象(1)妊娠早期组(P组):共274名,年龄19-35岁,平均(28.58±4.40)岁,均为2018年5月至2019年05月在兰州大学第二医院妇产科门诊就诊的单胎早期妊娠妇女;(2)未孕组(N组):共127名,年龄18-35岁,平均(29.48±4.23)岁,为与P组同时期妇产科门诊就诊的确认排除妊娠状态者。2.实验内容对符合纳入标准的研究对象仔细询问病史及是否有阴道炎相关症状,然后进行妇科检查,并使用无菌棉签拭子取阴道侧穹隆分泌物,取出后立即编号,编号后送实验室行阴道分泌物检查(主要检查内容有:阴道清洁度、白细胞、杂菌、革兰阴性双球菌、霉菌、滴虫、酸碱度、线索细胞等)。参考人卫第九版《妇产科学》教科室各种阴道炎的诊断标准,统计两组患者阴道炎的发病情况。第二部分妊娠早期念珠菌性阴道炎患者阴道菌群多样性研究1.实验对象(1)正常组:共10名,年龄25-32岁,平均(29.00±2.45)岁,为2018年5月至2019年05月在兰州大学第二医院产科门诊就诊的孕70-97天正常单胎妊娠孕妇;(2)VVC(念珠菌性阴道炎)组:共10名,年龄25-33岁,平均(30.20±3.19)岁,为与正常组同期门诊就诊妊娠早期孕妇,符合念珠菌性阴道炎诊断标准,同时排除合并其它类型阴道炎症者。2.实验内容2.1样本总DNA的提取:采用HiPure Soil DNA Kit B(Magen,Guangdong,China)严格按照其说明书提取各阴道分泌物样本全基因组DNA(每位患者收集的阴道分泌物取两份均进行DNA提取,分为两组)。2.2样本16S rDNA及ITS rDNA基因片段的扩增:取上述步骤提取的一组样本DNA(共20份),使用引物338F-806R扩增样本16S rRNA上V3-V4这两个高度可变区。取另一组样本DNA(共20份)使用ITS引物5’-GTGAATCATCGARTC-3’和5’-TCCTCCGCTTATTGAT-3’扩增样本ITS rDNA上的ITS2可变区。2.3 Illumina MiSeq测序及生物信息学分析:将上述样本16S rDNA及ITS rDNA的PCR产物检测浓度,在将其标定到10nM后,通过Illumina MiSeq(Illumina,San Diego,CA,USA)平台进行PE250的双端测序。测序后的序列信息通过Qiime 1.9.1软件等进行信息读取及分析,进一步进行OTUs提取、OTUs交叠、OTUs聚类分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析及组间群落结构差异显著性分析等。研究结果第一部分妊娠早期妇女阴道炎发病情况分析1.妊娠早期妇女阴道分泌物pH低于同年龄组未孕妇女阴道分泌物pH,其结果有统计学差异(P<0.05);2.妊娠早期及未孕期妇女阴道炎常见类型均为细菌性阴道病、念珠菌性阴道炎及滴虫阴道炎,两组间阴道炎发病率差异并无统计学意义(χ~2=0.009,P=0.924);3.妊娠早期患者细菌性阴道病、念珠菌性阴道炎发病率略高于及未孕期妇女,而滴虫阴道炎发病率略低于未孕期妇女。第二部分妊娠早期念珠菌性阴道炎患者阴道菌群多样性研究1.妊娠早期念珠菌性阴道炎患者的阴道pH明显高于正常孕妇组;2.妊娠早期VVC患者阴道细菌群落仍以阴道乳杆菌属为优势菌属,约占70.99%,但乳杆菌属的相对丰度较妊娠早期正常女性(约占97.99%)明显降低;3.通过对测序后生物信息进行Alpha多样性分析,结果显示妊娠早期VVC患者阴道细菌群落多样性较正常妊娠早期女性的增加,而阴道真菌群落多样性较正常妊娠早期女性的减低,且差异均有统计学意义(P<0.05);4.通过对两组样本的ITS rDNA测序生物信息进行LEfSe差异分析,结果提示VVC组中特征性的真菌属为念珠菌属(Candida),而在正常组中特征性的真菌为马拉色霉菌属(Malassezia)。研究结论1.妊娠早期VVC患者阴道pH值高于正常妊娠早期妇女;2.妊娠早期常见阴道炎发病率由高到低依次为:细菌性阴道病、念珠菌性阴道炎及滴虫阴道炎;3.妊娠早期VVC患者细菌群落多样性较正常妊娠早期孕妇增加,真菌群落多样性较正常妊娠早期孕妇降低;4.妊娠早期VVC组及正常妊娠早期孕妇两组之间存在群落结构差异,VVC组中特征性的真菌属为念珠菌属(Candida),而正常组中特征性的真菌属为马拉色霉菌属(Malassezia);5.妊娠早期VVC患者阴道细菌群落仍以乳杆菌属为优势菌属,但其丰度较正常妊娠早期女性明显降低。