CNTF在青光眼大鼠视网膜中的表达变化及对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞的影响

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目的(1)建立青光眼动物模型眼为进一步研究奠定基础;(2)探讨青光眼大鼠视网膜中睫状神经营养因子表达的变化;(3)研究睫状神经营养因子对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞活性和突起再生的影响。方法(1)采用电凝大鼠巩膜表面静脉及角膜周围血管的方法建立慢性高眼压性青光眼动物模型;(2)在模型建立后1天、7天和28天获取视网膜,采用免疫组化的方法探测睫状神经营养因子在视网膜组织中的表达的变化;(3)取新生1~3天大鼠视网膜,胰酶消化并用细胞筛纯化,接种于多聚鸟氨酸包被的96孔培养板,随机分为5组,24小时细胞贴壁后,换液时分别加入不含睫状神经营养因子及含10ng·ml-1、20ng·ml-1、30ng·ml-1、40ng·ml-1睫状神经营养因子的5种培养液,于加入含睫状神经营养因子培养液后第1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天以四甲基偶氮唑盐比色法测定不同浓度的睫状神经营养因子对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞总体活性的影响,计数在400倍相差显微镜和荧光显微镜下神经节细胞突起数。结果(1)在正常大鼠视网膜中,睫状神经营养因子主要表达于视网膜神经节细胞层,在青光眼大鼠视网膜中,睫状神经营养因子表达增加,不仅表达于视网膜的神经节细胞层,内核层、外核层中均出现表达;(2)加入含睫状神经营养因子培养液后第1~7天,加入高浓度的睫状神经营养因子组大鼠视网膜神经节细胞总体活性较高,至第7天,各组总体活性均有显著性差异(p<0.05),第13~15天,40 ng·ml-1的睫状神经营养因子对比20 ng·ml-1、30 ng·ml-1的睫状神经营养因子提高纯化培养大鼠视网膜神经节细胞总体活性的作用有下降趋势(p<0.05)。加入CNTF后3~5d,40 ng·ml-1组突起率显著高于对照组(P<0.05)。7~15d,20 ng·ml-1、30 ng·ml-1、40 ng·ml-1组突起率显著高于对照组(P<0.05),30 ng·ml-1、40 ng·ml-1组突起率显著高于10 ng·ml-1、20 ng·ml-1组(P<0.05)。结论(1)用前述方法成功建立了慢性青光眼动物模型;(2)青光眼动物模型建立后7~28天,视网膜中睫状神经营养因子除在神经节细胞层表达外,内核层、外核层也出现表达;(3)睫状神经营养因子有明显的提高纯化培养大鼠视网膜神经节细胞总体活性的作用,1~7天内睫状神经营养因子的浓度和纯化培养大鼠视网膜神经节细胞总体活性有量效关系,13~15天40 ng·ml-1的睫状神经营养因子提高纯化培养大鼠视网膜神经节细胞总体活性的作用有下降趋势。CNTF能显著促进RGCs突起再生,CNTF的浓度和突起率存在量效关系,一定浓度范围内,高浓度CNTF可较早促进突起再生。
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