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目的：构建葡萄糖球菌肠毒素A（staphylococcal enterotoxin A，SEA）与锚定蛋白的糖基化磷脂酰肌醇GPI（glycosylphosphatidylinositol，GPI）的真核共表达质粒pIRES-EGFP-SEA-GPI、黑色素瘤抗原A3（melanoma-associated antigen A3，MAGE-A3）的真核表达质粒pIRES-EGFP-MAGE-A3，共转染喉癌Hep-2细胞，制备exosomes，检测双基因在exosomes中的表达。 方法：利用NOT I酶切的方法从原核质粒中提取-SEA-GPI-基因片段，并克隆到真核质粒pIRES-EGFP，同时将化学合成的MAGE-A3基因片段克隆到pIRES-EGFP。脂质体法将pIRES-EGFP-SEA-GPI、pIRES-EGFP-MAGE-A3双基因共转染喉癌Hep-2细胞，提取喉癌细胞中的RNA，荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测目的基因-SEA-GPI-及MAGE-A3在喉癌细胞的转录情况。采用exosomes提取试剂盒提取喉癌细胞分泌的exosomes，Western blot测定SEA、MAGE-A3在exosomes中的表达。 结果：构建的两种真核质粒pIRES-EGFP-SEA-GPI、pIRES-EGFP-MAGE-A3转染喉癌Hep-2细胞，qRT-PCR测出其在喉癌细胞中有有效转录。Western blot测出exosomes中有SEA、MAGE-A3表达，表明喉癌细胞来源的exosomes存在了SEA、MAGE-A3，SEA通过GPI结构锚定于exosomes膜上。 结论：成功地将两种真核质粒共转染喉癌Hep-2细胞，制备出喉癌Hep-2细胞分泌的exosomes表达有SEA、MAGE-A3，并且SEA通过GPI锚定在exosomes膜上。为制备、探索SEA-Texosome-MAGEA3瘤苗对喉癌做靶向免疫治疗，奠定了基础。