GSH对H2O2诱导人髓核细胞死亡与基质破坏的保护作用

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目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)对过氧化氢(H2O2)诱导人髓核(nucleus pulposus,NP)细胞死亡与基质破坏的保护作用。方法使用藻朊酸盐珠(Alginate beads)方法培养人NP细胞。首先,选取不同浓度H2O2对人NP细胞进行处理,分别构建H2O2诱导的人NP细胞死亡以及细胞外基质破坏的细胞模型。Alginate beads中细胞按以下处理分组:1.空白对照组;2.H2O2处理组;3. H2O2/GSH同时处理组。通过活/死细胞染色与细胞凋亡染色评估细胞的生存质量,采用人工计数死亡细胞与凋亡细胞数区分细胞生存率。RT-PCR分析2种细胞外基质基因聚集蛋白聚糖与Ⅱ-型胶原纤维的基因表达。结果活/死细胞染色显示高浓度H2O2 (500um)诱导的人NP细胞促进细胞死亡(P<0.01)。H202浓度大于(4uM)诱导的人NP细胞,聚集蛋白聚糖与Ⅱ-型胶原纤维的破坏明显示增加(P<0.05)。活/死细胞染色显示H202组死亡细胞率高于GSH/H2O2组(P<0.01);细胞凋亡染色显示相似的结果(P<0.05)=H2O2诱导人NP细胞的聚集蛋白聚糖与Ⅱ-型胶原纤维的基因表达破坏明显多于GSH/H2O2组(P<0.05)结论低浓度H2O2 (20uM)诱导人NP细胞外基质破坏与高浓度H2O2 (500uM)诱导人NP细胞死亡能够被GSH (1mM)有效预防,预示着抗氧化剂治疗可能成为椎间盘退变治疗的新方法。
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