【摘 要】
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群体感应(Quorum sensing,QS)广泛存在于革兰氏阴性菌(Gram negative bacteria,G-)和革兰氏阳性菌(Gram positive bacteria,G+)中,是细菌种内、种间细胞间及细菌与宿主间信息交流的重要途径,调控细菌许多重要的生理功能。吡咯伯克霍尔徳氏菌(Burkholderia pyrrocinia)JK-SH007为一株能有效防治杨树溃疡病的内生生防菌
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群体感应(Quorum sensing,QS)广泛存在于革兰氏阴性菌(Gram negative bacteria,G-)和革兰氏阳性菌(Gram positive bacteria,G+)中,是细菌种内、种间细胞间及细菌与宿主间信息交流的重要途径,调控细菌许多重要的生理功能。吡咯伯克霍尔徳氏菌(Burkholderia pyrrocinia)JK-SH007为一株能有效防治杨树溃疡病的内生生防菌,明确其QS系统与其内生定殖机理将有助于揭示其生防机制。主要研究结果如下:(1)通过乙酸乙酯萃取、旋转蒸发得到JK-SH007菌株的AHLs粗提物和DSF粗提物,并利用QS指示菌和色谱技术确定了JK-SH007菌株有两个QS系统,即Cep IR系统和DSF系统,产生的QS信号物质种类分别为C8-HSL和BDSF。(2)利用结晶紫染色、菌体回收、GFP标记等技术,研究QS信号物质C8-HSL和BDSF对JK-SH007菌株生物膜形成及在杨树苗内生定殖能力的影响。结果表明,C8-HSL在一定浓度范围内能促进JK-SH007菌株生物膜的形成及内生定殖能力,C8-HSL对该菌株在杨树内的内生定殖能力密切相关,具有增强JK-SH007菌株内生定殖的能力。(3)通过对其群体感应信号物质合成酶基因克隆及分析,JK-SH007菌株存在QS信号分子编码基因Cep I和Rpf F的同源序列。利用生物信息学软件,对基因的功能和特征进行分析。Cep I基因的开放阅读框为609 bp,编码202个氨基酸,p I为5.82,含有9个磷酸化位点。Rpf F蛋白分子量为33980.85 Da,理论等电点为5.94,含有10个磷酸化位点。Cep I和Rpf F蛋白都无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构显示,Cep I和Rpf F蛋白最大量的结构元件都包括α-螺旋(Alpha helix)、β转角(Beta bend)、延伸链(Extended strand)和无规则卷曲(Random coil)等。在Cep I蛋白中无规则卷曲比例最高,达到了总二级结构的42.08%;β转角比例最小,占总二级结构的5.94%;α-螺旋占总二级结构的34.65%;β折叠占总二级结构的17.33%。Rpf F蛋白的二级结构预测结果则显示,α-螺旋比例最高,达到了总二级结构的50.66%;β转角比例最小,占总二级结构的6.91%;延伸链占总二级结构的14.80%;无规则卷曲占总二级结构的27.63%。JK-SH007菌株的Cep I和Rpf F基因分别与菌株B.stabilis LR025743和菌株B.pyrrocinia CP011504的亲缘关系最近,同源性分别为100%和97.49%,两者序列相似性分别为94%和97.49%;另外JK-SH007菌株Cep I和Rpf F基因编码的氨基酸序列分别有9个和7个氨基酸发生了替换,两者一致性分别为91%和93%。(4)通过构建群体感应信号物质合成酶基因过表达株,并对JK-SH007野生株、过表达株进行检测比较,研究发现Cep IR系统正调控JK-SH007菌株的生长量、生物膜形成量及内生定殖能力。结果表明,JK-SH007菌株的Cep IR系统与BDSF系统在调控生物膜形成及其内生定殖能力方面存有差别,Cep IR系统在生物膜形成及定殖方面可能发挥主要作用。以上结果证实了JK-SH007群体感应系统与其在杨树内生定殖存在相关性,有利于揭示该菌株群体感应信号物质合成酶基因的功能,也为提高菌株在植物的内生定殖能力提供新的途径,为后续实际应用提供理论依据。
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