甘肃棘豆生物碱部位体内外抗肿瘤活性的实验研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyattwong
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目的:(1)研究甘肃棘豆生物碱部位对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及免疫功能的影响。(2)探讨甘肃棘豆生物碱部位对人胃癌细胞株BGC-823增殖、细胞周期、凋亡、细胞形态、粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:(1)健康昆明种小鼠随机分为两组,即甘肃棘豆生物碱部位组和空白对照组,每组10只。小鼠禁水12h后给予3000 mg·kg-1,最大容积40 mL·kg-1一次性灌胃给药,对照组给予等体积的生理盐水。两周后将小鼠处死,解剖并观察主要脏器的变化。(2)将接种S180肿瘤细胞株后的小鼠随机分为5组,灌胃给药10d,停药后24h处死动物,称体重,剥除肿瘤称瘤重,同时解剖小鼠,称脾重、胸腺重,计算脾指数、胸腺指数,用MTT法测定脾细胞增殖率。(3)甘肃棘豆生物碱部位不同剂量作用人胃癌细胞株BGC-823后,采用MTT法、流式细胞术、倒置显微镜、粘附抑制实验及Boyden小室法检测药物对该肿瘤细胞增殖、形态、粘附、侵袭和迁移能力的影响。结果:(1)急性毒性实验:大剂量口服甘肃棘豆生物碱部位的正常小鼠解剖后,肉眼观察其重要脏器无异常变化,体重及心、肝、肺、肾等脏器的重量与对照组相比没有统计学意义(P>0.05)。进一步对两组小鼠的脏器进行常规HE染色,未发现明显异常。(2)甘肃棘豆生物碱部位高、中、低3个剂量组对S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用与阴性对照组相比较均有统计学意义(P<0.05),以中剂量组(32 mg·kg-1)效果最好。与5-FU组相比,生物碱部位各组对肿瘤的抑制作用稍弱。(3)甘肃棘豆生物碱部位3个剂量组均能使小鼠的脾指数、胸腺指数及脾细胞增殖率增高,与阴性对照组和5-FU组相比有统计学意义(P<0.05),且以低剂量组作用明显。24h、48h、72h脾细胞增殖率比较,以24h增殖率最高。(4)MTT检测结果显示不同浓度、不同作用时间的甘肃棘豆生物碱部位对BGC-823细胞株的生长有着不同程度的抑制,以最高剂量200μg·mL-1作用效果最好,随着剂量的减低,药物对细胞的抑制作用逐渐减弱。(5)流式细胞术观察不同剂量的甘肃棘豆生物碱部位对BGC-823细胞周期的影响,显示该药对细胞周期的影响呈剂量依赖性,将BGC-823细胞主要阻滞在G0/G1期,与对照组和5-FU组相比,均有明显的统计学意义(P<0.01),其中以200μg·mL-1组对细胞周期的阻滞作用最强。药物对BGC-823细胞凋亡的作用检测,未发现明显的凋亡峰出现。(6)细胞形态学观察不同剂量的甘肃棘豆生物碱部位对细胞生长具有明显的抑制作用,使细胞形态改变,部分贴壁细胞收缩变圆、漂浮;细胞数目明显减少,与对照组比较有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。(7)粘附抑制实验结果显示甘肃棘豆生物碱部位不同剂量的处理组中,以高剂量组对细胞与胶原的粘附抑制作用最强,各组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);高剂量组与5-FU组相比,在不同时间段差异也具有统计学意义(P<0.05)。(8)Boyden小室侵袭实验结果显示甘肃棘豆生物碱部位高剂量组侵袭穿膜细胞数为71.67±9.29,与对照组和5-FU组相比较,差异具有明显的统计学意义(P<0.01);生物碱部位高剂量组与低剂量组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);中剂量组和低剂量组分别与对照组和5-FU组比较,侵袭穿膜细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。(9)Boyden小室迁移实验结果显示甘肃棘豆生物碱部位高剂量组迁移穿膜细胞数为78.0±8.19,与对照组相比较,差异具有明显的统计学意义(P<0.01),与5-FU组相比较,差异也有统计学意义(P<0.05);生物碱部位中剂量组与对照组和5-FU组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);生物碱部位低剂量组与对照组和5-FU组相比较,迁移穿膜细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)甘肃棘豆生物碱部位大剂量用药对正常小鼠无明显的毒副作用。(2)甘肃棘豆生物碱部位对S180荷瘤小鼠的肿瘤有一定抑制作用。(3)甘肃棘豆生物碱部位可以增强S180荷瘤小鼠的免疫功能。(4)甘肃棘豆生物碱部位在体外对BGC-823胃癌细胞株的抑制作用呈现一定剂量和时间依赖性,并且可以影响肿瘤细胞的形态变化。(5)甘肃棘豆生物碱部位可以影响BGC-823细胞周期,药物作用后将细胞阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少,从而影响细胞的DNA合成,进而对细胞增殖起到抑制作用。(6)甘肃棘豆生物碱部位可以抑制BGC-823胃癌细胞株与基质的粘附,抑制细胞的侵袭和迁移。
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