牛瑟氏泰勒虫病是一种危害养牛业健康发展的重要血液原虫病,患畜主要表现高热、贫血、黄疸等临床特征。目前,对该病的防控尚无有效的方法。本试验根据牛瑟氏泰勒虫MPSP的p23(EU573168.1)和P33(DQ078264.1)基因序列,经过序列分析去除其信号肽序列后设计了2对特异性引物。将PCR扩增出的p23、p33基因克隆到pMD18-T Simple Vector上,将鉴定正确的p23、p33基因分别亚克隆到原核表达载体pET30a进行原核表达,应用Western blot进行鉴定,并筛选了表达蛋白的最适诱导剂浓度、最适生长培养基、最适诱导时间。对重组表达蛋白存在形式进行了鉴定后,制备亚单位疫苗,先后免疫实验动物BALB/c小鼠和本体动物牛,并测定了试验动物的抗体水平和细胞因子水平,评价疫苗的免疫效果。在三免后第7周进行了一次加强免疫以加强免疫效果。结果显示,PCR扩增的p23、p33基因片段大小分别为585bp和783bp,原核表达融合蛋白分子量分别为24kDa和31kDa, Western blot结果显示二者均具有较好的反应原性。pET30a-p23、pET30a-p33原核表达产物进行诱导表达的最适诱导剂IPTG浓度为0.1mM,最适诱导时间为6h,最适生长培养基分别为LB、SOC液体培养基。实验动物BALB/c小鼠的最大安全免疫剂量为100μg/只,接种实验动物的抗体水平、细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-4水平及T淋巴细胞亚群分析结果表明,pET30a-p23、pET30a-p33联合免疫组能够诱导BALB/c小鼠产生较高的体液免疫及细胞免疫水平,与pET30a-p23、pET30a-p33单独免疫组比较,差异均显著(P<0.05),而与空白对照组比较,差异均极显著(P<0.01)。疫苗接种本体动物牛产生的特异性抗体水平、细胞因子IL-2、IFN-Y和IL-4水平分析结果表明,pET30a-p23、 pET30a-p33联合免疫组能够诱导本体动物产生较好的体液免疫和细胞免疫水平,并维持这种水平5周以上,与pET30a-p23、pET30a-p33单独免疫组比较,差异显著(P<0.05),与空白对照组比较,差异极显著(P<0.01)。三免后第7周的加强免疫,可诱导实验动物BALB/c小鼠和本体动物牛机体产生较一次性免疫更高的免疫效果。本试验的联合免疫方案为牛瑟氏泰勒虫病的免疫预防提供了新的思路。