伊氏锥虫病:LAMP诊断方法和抗血清混合物抗虫效果的研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoqing123456789
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本实验室以前在伊氏锥虫病的血清治疗方面取得了一定的进展,本研究以此为基础,建立一套完整的血清治疗方案来有效地控制伊氏锥虫病,即建立伊氏锥虫病的早期诊断技术和抗血清混合物治疗方案。 伊氏锥虫病的早期诊断技术:环介导的DNA等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是新近发展起来的一种核酸扩增法,它通过一种具有链置换特性的BstDNA聚合酶完成靶序列的扩增。LAMP同PCR一样具有高特异性和高敏感性,但LAMP不需变性、退火、延伸等步骤,仅需恒温加热就能扩增DNA,并且DNA扩增与否还可通过白色沉淀的产生来判别。本实验利用Kuboki等针对布氏锥虫PFRA1基因设计的引物来建立LAMP反应对伊氏锥虫病进行检测,同时以PCR法作比较,结果LAMP、PCR均具有100%的特异性,敏感性也均为83%,这些数据表明LAMP可取代PCR作为伊氏锥虫的早期感染或低虫血症诊断方法。 抗血清混合物治疗:唾传类锥虫在感染动物后会刺激动物机体产生显著而持久的免疫应答,并以体液免疫为主。新产生的抗体对锥虫有极强的杀伤力,系清除血液中锥虫的因素。然而锥虫可以通过体表抗原变异的方式逃避体内体液免疫系统的清除。据预测布氏锥虫的VAT数超过1000,但在伊氏锥虫,许多研究表明其优势VAT数量是有限的并且比较少。本实验利用C01、C11、C21、C31、C41和C51六个伊氏锥虫YNB株克隆群体分别感染一只新西兰白兔,之后每隔两天采集一次血清,共采集10次;将获得的60份抗血清等量混合,然后用此抗血清混合物对感染伊氏锥虫的小鼠进行治疗,检测其抗虫效果。结果此抗血清混合物对同源株伊氏锥虫早期感染的小鼠具有100%的保护力,对异源株伊氏锥虫早期感染的小鼠也有部分保护作用。 以上结果表明这套完整的血清治疗方案能有效地控制小鼠伊氏锥虫早期感染,这对人锥虫病的治疗具有重要的意义。
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