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目的:CyclinD1蛋白是重要的细胞周期调节蛋白,在G1/S转换处发挥重要的作用,它的编码基因CCND1在转录水平可以产生长短两种转录本,CCND1基因这种转录变异对肿瘤发生发展的生物学作用以及两种转录本的拷贝数异常是否与cyclinD1蛋白的异常表达相关目前还不是很清楚。为此本实验研究了CCND1基因长短两种转录本及其蛋白产物cyclinD1在宫颈癌组织中的表达情况,并分析了两种转录本之间拷贝数的异常是否与cyclinD1蛋白的异常表达相关。
实验材料与方法:
一、实验资料病例组标本来自于中国医科大学附属盛京医院妇产科2009年1月至2009年10月间宫颈活检、全子宫切除术或宫颈癌根治性手术的35例宫颈癌患者,同时收集30例因子宫肌瘤行全子宫切除术并经病理证实无宫颈病变的正常宫颈组织作为对照组,并从存档的宫颈标本蜡块中选取相对应的石蜡标本。
二、实验方法
采用实时定量PCR检测35例宫颈癌组织和30例正常宫颈组织中CCND1基因两种转录本mRNA的表达同时应用免疫组化技术(SP)检测cyclinD1蛋白在两种组织中的表达。
三、统计学分析采用SPSS16.0软件进行统计学分析,两独立样本Mann-Whitney U检验分析CCND1基因长短转录本在宫颈癌与正常组织中表达水平的差异,独立样本t检验分析不同分化程度的富颈癌组织的平均光密度值,实验数据用(?)±s表示,P<0.05有统计学意义。
实验结果:
一、宫颈癌组织与正常宫颈组织中长短转录本转录的相对差异CCND1基因长、短转录本在宫颈癌组织中的表达均较在正常宫颈组织中降低,其中短转录本降低更加明显。
二、宫颈癌组织中,不同分化程度组织间长短转录本表达的相对差异在不同分化程度的宫颈癌组织间,短转录本在低分化组织中较高、中分化组明显下降,而长转录本在低分化组中转录量高于高、中分化组,但无统计学意义。
三、宫颈癌组织与正常宫颈组织中cyclinD1蛋白表达的相对差异在宫颈癌组cyclinD1蛋白在细胞核和细胞浆中均有所表达但以细胞核表达为主,阳性表达率为57.14%;正常宫颈组织中一般无cyclinD1蛋白的表达或仅有个别在基底层细胞中呈现阳性表达,表达率13.33%;cyclinD1蛋白在宫颈癌组的阳性表达率高于正常宫颈组。
四、宫颈癌组织中,不同分化程度组织间cyclinD1蛋白表达的相对差异宫颈癌组织中,高、中分化组的平均光密度值为0.16,高于低分化组的平均光密度值0.11。
结论:CCND1基因的短转录本对于宫颈癌可能存在保护作用,同时CCND1基因的两种转录本的相对表达量的差异不会影响cyclinD1蛋白总的表达量.