论文部分内容阅读
中药有效成分群辨识技术的研究是中医药研究的关键技术之一,本论文以临床具有显著疗效但尚未进行系统研究的中药材猫爪草为研究对象,对有效成分群的辨识方法及功效相关性进行了探索性研究。
猫爪草Radix Ranunculi Ternati系毛茛科植物小毛茛Ranunculusternatus Thunb.的块根,性甘、辛,微温,具有清热解毒、消肿散结的功效,临床研究表明,猫爪草及其制剂对肺结核、淋巴结核和多种癌症及淋巴瘤具有显著疗效。现代药理研究表明,猫爪草水提液不仅对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等细菌有抑制作用,对S-180肿瘤株有显著抑制作用。
论文以化合物类别为试验单位,以结核杆菌药敏试验和细胞毒试验为药效指标,筛选了有效部位,并应用HPLC-MSn技术进行了谱效相关性和化合物辨识方法的探索性研究,进行了有效部位成分的分离和药材质量控制的研究。
论文由文献综述和实验两部分组成。
第一部分文献综述
通过对报道文献资料的研究,对猫爪草的植物来源和商品用药、资源分布、化学成分、质量控制、药理活性、功效主治及临床应用等方面的研究进行了较为系统的综述。
第二部分实验部分
一、有效部位的研究
1.论文采用树脂分离结合溶剂萃取的方法,以化合物类别为分离单位,提取分离了进行药效试验的物质,并结合结核杆菌药敏试验和细胞毒试验,进行了有效部位筛选试验。
2.应用HPLC-MS技术首次对猫爪草有效部位进行了谱效相关性研究;并应用HPLC-MS/MS技术首次对有效部位的化学成分进行了辨识方法的探索;检索了有效部位31个化学成分可能的化学式,并利用HPLC-MS/Ms的碎片离子的精确质量数,推测了裂解方式,根据碎片信息,推测了19个可能的化合物,并用对照品验证了丁二酸、辛二酸、壬二酸、癸二酸、咖啡酸等化学成分。
3.首次通过对MS/MS失去碎片信息的分析,统计结果显示有效部位中有多种有机酸存在,并可分为四类:一为芳香酸及其糖苷,二为脂肪二元酸及其糖苷,三为羟基羧酸及其糖苷,四为杂环羧酸及其糖苷,其化合物辨识及验证尚有待进一步探索。
4.利用C18、硅胶、葡聚糖凝胶(LH-20)等层析分离技术及制备液相等手段对有效部位进行了分离,得化合物有:辛二酸,壬二酸、癸二酸、咖啡酸、香草酸、β-谷甾醇。其中辛二酸、壬二酸、癸二酸、咖啡酸、香草酸为本论文首次从猫爪草中分离得到。
二、药材质量控制研究
根据现行版《中国药典》药材质量标准的条款及目前该药材的药典标准,论文在鉴别、检查和含量测定项进行了研究,并起草了药材质量标准修订草案。研究内容包括以下4个方面:
1.鉴别项,研究制定了药材的薄层鉴别方法;同时论文首次研究了应用傅立叶变换红外分光光度法对猫爪草药材进行鉴别的方法,并探索了应用红外分光光度法进行药材鉴别的参数设置。
2.检查项,对10批次药材的水分、灰分、酸不溶性灰分、重金属和浸出物含量进行了测定,为修订质量标准提供了参考依据。
3.含量测定项,结合药效试验,选择了总游离酸、总黄酮为分析对象,进行了猫瓜草中总游离酸和总黄酮含量测定方法的研究。
(1)首次建立了应用电位返滴定法,直接测定药材中总酸含量的方法,该方法操作简便、结果可信,重复性好,方法学考察结果表明:符合含量测定的要求。
(2)应用差示分光光度法的原理,以碱性供试品溶液为参比,建立了中药材猫爪草中总黄酮含量的测定方法。方法操作简便,结果可信,重现性好,方法学考察结果表明:方法符合含量测定要求。
4.论文首次起草了比较完整的中药材猫爪草的质量标准修订草案,为药典标准的修订提供了参考依据。