【摘 要】
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目的:建立胎牛肺间充质干细胞（Lung-derived mesenchymal stem cells,LMSCs）的体外培养体系、研究其生物学特性,探究胎牛肺间充质干细胞对脂多糖介导的小鼠急性肺损伤的治疗修复作用。方法:（1）LMSCs的分离及培养:以3-4个月龄流产胎牛牛肺为研究材料,采用胶原酶消化法及组织块贴壁法获得LMSCs,并进行传代培养。（2）LMSCs生物学特性研究:形态学观察,绘制细
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目的:建立胎牛肺间充质干细胞（Lung-derived mesenchymal stem cells,LMSCs）的体外培养体系、研究其生物学特性,探究胎牛肺间充质干细胞对脂多糖介导的小鼠急性肺损伤的治疗修复作用。方法:（1）LMSCs的分离及培养:以3-4个月龄流产胎牛牛肺为研究材料,采用胶原酶消化法及组织块贴壁法获得LMSCs,并进行传代培养。（2）LMSCs生物学特性研究:形态学观察,绘制细胞生长曲线,计算群体倍增时间;特异性表面标志物RTPCR和免疫荧光检测,多向分化潜能:将LMSCs定向诱导分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞,并对诱导后的细胞进行特异性染色、RT-PCR鉴定。（3）采用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对小鼠进行直接腹腔注射,建立小鼠急性肺损伤的模型,采用LMSCs对小鼠进行注射治疗,通过观察组织学切片及血清学检测对小鼠肺损伤程度及预后进行评估。结果:（1）采用胶原酶IV成功分离出胎牛LMSCs,体外培养并传至第22代,细胞形态多呈长梭形或纺锤形,核质比大,边缘不规则。（2）LMSCs细胞生长曲线呈典型的“S”型,增殖过程历经潜伏期、对数期、平台期和衰退期,细胞的群体倍增时间分别为31.60h、35.18h和39.23h。胎牛LMSCs经RT-PCR检测结果表明可阳性表达CD29、CD44、CD166和CD73,而不表达CD31。胎牛LMSCs经免疫荧光检测证明其可以阳性表达CD29、CD73、CD44和CD166。LMSCs可以成功诱导成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞。（3）用LMSCs治疗组小鼠与损伤组小鼠比较病理切片可观察到肺损伤面积和程度明显缩小,炎症细胞浸润减少、间质有所增厚及胶原少量沉积,血清学检测显示可以有效的降低损伤组血清中TNF-α水平,参与调控IL-1β、IL-6、IL-10的分泌及免疫应答作用。结论:本研究成功分离并体外培养胎牛LMSCs,将体外培养的LMSCs细胞用在由LPS介导的小鼠急性肺损伤模型上,结果验证LMSCs对急性炎性反应有一定的治疗作用,为再生医学和器官移植医学提供了进一步的实验探索。
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