MICA基因多态性与习惯性流产、不孕症的相关性研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qutong19921107
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目的:(1)研究湖南和湖北地区汉族人群中MICA基因多态性分布特征;(2)研究MICA基因多态性与习惯性流产、不孕症的关系,并进一步探讨可能的分子机制。方法:(1)PCR-SSP法分析162例湖南地区汉族人群和193例湖北地区汉族人群MICA基因外显子2-4的多态性,并与其他人群中该基因的分布进行比较;(2)PCR-SSP方法检测56例习惯性流产患者和78例正常对照的MICA基因外显子2-4多态性分布,并进行相关性分析;(3)PCR-SSP法检测214例不孕症患者MICA基因外显子2-4多态分布,ELISA法检测患者血清抗沙眼衣原体IgG抗体,并进行相关性分析;(4)直接测序法确定HeLa细胞和U373细胞的MICA基因型;通过实时定量PCR、Western blot和流式细胞术分别从mRNA、蛋白质水平检测沙眼衣原体感染HeLa细胞和U373细胞后,不同时间点(0h、12h、24h、36h)MICA mRNA、MICA总蛋白和细胞膜表面MICA分子的变化,并通过体外细胞毒实验检测NK细胞对沙眼衣原体感染的HeLa细胞和U373细胞在不同时间点(0h、12h、24h、36h)的杀伤效应。结果:(1)湖南汉族人群中共检测到11个MICA等位基因,其中MICA*00801/02等位基因频率最高(40.4%),其次为MICA*00201/020(20.1%)和MICA*010(17.3%),MICA*019(0.3%)和MICA*031(0.3%)等位基因频率最低;湖北汉族人群中共检测到13个MICA等位基因,其中MICA*00801/02等位基因频率最高(33.7%),其次为MICA*010(18.4%)、MICA*00201/020(13.9%)和MICA*01201/02(9.6%),MICA*005(0.5%)和MICA*027(0.5%)等位基因频率最低;两个地方人群MICA等位基因分布频率与其他人群(朝鲜人、泰国人、美洲白人和非洲裔美洲人)比较,有显著性差异(P<0.05);(2)习惯性流产患者组中共检测出8个MICA等位基因,其中MICA*00801/02等位基因分布频率较高而MICA*018等位基因分布频率最低;正常对照组中共检出9个MICA等位基因,经统计学分析,其中也是MICA*00801/02等位基因分布频率较高,而MICA*005和MICA*01201/02等位基因分布频率最低,习惯性流产患者与正常对照组之间MICA各等位基因分布频率均无显著性差异(P>0.05);(3)有输卵管病理改变的不孕症患者中66.7%(42/63)的个体抗沙眼衣原体IgG抗体阳性,而无输卵管病理改变的不孕症患者中仅39.1%(59/151)的个体抗沙眼衣原体IgG抗体阳性(OR:3.12,95%CI:1.68-5.78,P=0.004),高水平的抗沙眼衣原体IgG抗体增加了不孕症患者输卵管发生病理改变的风险性(OR:6.88,95%CI:3.34-14.20,P=0.001);根据抗沙眼衣原体IgG抗体是否为阳性对不孕症患者进行分组,两组中共检测到9个MICA等位基因,其中等位基因MICA*008在两组间的分布存在差异,抗沙眼衣原体IgG抗体阴性的不孕症患者组MICA*008分布频率显著高于抗沙眼衣原体IgG抗体阳性的不孕症患者组(38.1%:22.3%,P=0.0004,Pc=0.00367,OR:2.14,95%CI:1.40-3.28);根据是否存在输卵管病理改变对不孕症患者进行分组,两组间MICA等位基因分布频率无显著性差异(P>0.05);根据是否有输卵管病理改变对抗沙眼衣原体IgG抗体阳性的不孕症患者进行分组,两组间MICA等位基因分布频率无显著性差异(P>0.05);(4)HeLa细胞为MICA*008纯合子,U373细胞为MICA*001纯合子;沙眼衣原体感染HeLa细胞和U373细胞0h-36h时两细胞的MICA mRNA变化趋势相同,其中0h时MICA mRNA均有低水平的表达,12h时表达水平升高,24-36h时表达水平降低;沙眼衣原体感染HeLa细胞0h-36h时MICA蛋白表达水平未降低;沙眼衣原体感染U373细胞0h-12h时MICA蛋白表达水平降低不明显,24h-36h时蛋白表达水平降低;沙眼衣原体感染HeLa细胞0h-36h时细胞膜MICA蛋白表达水平较稳定,沙眼衣原体感染U373细胞0h-12h时细胞膜MICA蛋白表达水平变化不明显,24h-36h时表达水平降低;随感染时间的延长(0h-36h),NK细胞对沙眼衣原体感染HeLa细胞的杀伤效应不断增高;NK细胞对沙眼衣原感染的U373细胞12h杀伤效应增高,24h-36h杀伤效应降低。结论:(1)湖南和湖北汉族人群MICA外显子2-4等位基因的分布频率与其他人群之间存在差异,其中MICA*00801/02等位基因分布频率均较高;(2)MICA外显子2-4等位基因多态性分布与习惯性流产之间无相关性;(3)不孕症患者抗沙眼衣原体IgG抗体水平与其输卵管病理改变相关;(4)不孕症患者MICA*008等位基因分布频率与抗沙眼衣原体IgG抗体负相关;(5)不孕症患者MICA基因的多态性分布与输卵管病理改变、沙眼衣原体感染引起的输卵管病理改变之间均无相关性;(6)感染沙眼衣原体后HeLa细胞和U373细胞MICA mRNA表达水平的变化相同,但MICA总蛋白和细胞膜MICA蛋白表达的变化不同;(7)NK细胞对感染沙眼衣原体的HeLa细胞和U373细胞杀伤效应不同。
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