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目的:RECK(reversion inducing cysteine-rich protein with kazal motifs)基因是新型基质金属蛋白酶抑制剂。本文研究幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染人胃上皮细胞系GES-1后,对其RECK基因启动子区域的甲基化以及mRNA表达水平的影响,及其NF-κB在Hp诱导RECK基因表达异常中的作用。探讨Hp感染致胃癌的可能机制。方法:用培养的Hp按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.5:1的浓度感染GES-1细胞,培养0～144h。感染结束后,提取细胞DNA,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(Methylation-specific PCR,MSP)法检测RECK启动子区域的甲基化及非甲基化情况;采用逆转录PCR(RT-PCR)检测GES-1细胞内RECK mRNA水平;提取细胞总蛋白和核蛋白,Western blot检测p65的核转位情况;为进一步探讨NF-κB与RECK基因表达的关系,Hp在感染GES-1细胞的同时,加入25μM NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)共同孵育,RT-PCR检测其对RECK表达的影响。结果:(1)Hp感染GES-1细胞0~72h内,MSP结果显示,尚未检测出RECK基因甲基化条带,但能检测出明显的非甲基化条带。当Hp感染96h后,MSP能检测出微量的RECK甲基化条带。感染144h后,GES-1细胞内出现了明显的甲基化RECK条带,此时非甲基化条带明显减弱。(2)Hp感染GES-1细胞144h后,RT-PCR结果显示, RECK基因mRNA水平明显降低,而在0~72h内表达水平无明显变化。(3)Hp感染24h后即可检测出p65蛋白转移至核内,表明Hp感染GES-1细胞后能激活其NF-κB,24~72h时间内NF-κB激活水平无明显改变。但当感染至96h后,NF-κB的活性有所增强。(4)Hp与PDTC共同与GES-1孵育后,PDTC能在96~144h时间处明显增强RECK基因mRNA的表达。结论:Hp感染人胃上皮细胞系GES-1后,通过诱导RECK启动子区域甲基化和促进NF-κB激活,降低RECK基因的表达,进一步导致MMP的灭活减弱。这可能是Hp致胃癌的可能机制之一。