悬浮培养发菜胞外多糖生物活性研究

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发菜(Nostoc flagelliforme)是一种能够在干旱地区良好生长的具有很高食用价值和药用价值的陆生蓝藻。目前,野生发菜资源匮乏,而悬浮培养发菜既可以提高生长速度,又不消耗野生资源,是发菜获取的重要途径。悬浮培养发菜富含多种活性成份,其中发菜多糖是重要的活性成分之一,被认为是一种新型的生物活性多糖。目前研究主要集中在其抗病毒、抗肿瘤等方面的活性,关于其它方面的生物活性还有待探究。本课题以悬浮培养发菜为研究对象,提取发菜胞外多糖,研究悬浮培养发菜胞外多糖的体内外免疫活性、抑菌性及抗炎性等生物活性,以期为发菜多糖功能性食品和药物的研究与开发提供理论基础。试验得出以下结果:1.通过发菜培养液蒸发浓缩,脱蛋白,透析等一系列处理,获得发菜胞外多糖。单因素试验和响应面优化试验得出发菜胞外多糖最佳提取工艺条件为:乙醇浓度99%,乙醇倍数4.5倍,浓缩倍数8倍。2.通过比较不同培养时间(0、12、24、36、48、60和72h)和不同浓度(0、25、50、100和200μg/mL)发菜胞外多糖分别对小鼠脾淋巴细胞增殖和转化活性的影响,研究发菜胞外多糖的体外免疫活性。试验结果显示,不同培养时间和不同浓度的发菜多糖均能一定程度地提高小鼠脾淋巴细胞的增殖转化能力,并且表现一定的剂量效应关系。表明发菜多糖具有增强小鼠体外免疫功能的作用。3.通过小鼠脏器指数试验,碳粒廓清试验,迟发型变态反应试验和定量溶血分光光度试验,观察发菜胞外多糖对小鼠体内免疫活性的影响。试验结果显示,与模型对照组相比,多糖组小鼠的脏器指数、碳廓清指数、吞噬指数及足跖增厚值都显著增大,且脾脏B细胞分泌抗体能力显著增强。表明发菜多糖具有增强小鼠体内免疫功能的作用。4.通过测滤纸片周围抑菌圈直径大小,探究发菜胞外多糖抑菌性。比较得出发菜多糖对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌都有一定的抑制作用,尤其抑制沙门氏菌作用最强,抑制作用随着多糖浓度的增大而增强;发菜多糖能够抑制青霉与红曲霉,而对根霉没有抑制作用。5.通过观察发菜胞外多糖对小鼠炎症的影响,得出发菜多糖能够有效缓解二甲苯造成的小鼠耳部炎症,并呈一定的量效关系;发菜多糖对角叉菜胶引起的小鼠足部炎症有一定抗炎效果,尤以低剂量效果最佳。
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