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[研究目的]为探讨野生型p53基因对云南宣威肺腺癌XWLC-05细胞株是否具有放射增敏作用,本研究建立了p53功能正常的XWLC-05细胞株模型,不同剂量照射,观察有无野生型p53基因状态与放射敏感性的关系,及其细胞凋亡和周期分布。【研究方法】1.携带野生型p53基因的质粒（PC53-SN3）和空载体质粒（PCMV-Neo-Bam）的电转化、扩增与酶切鉴定分析。2.阳离子脂质体LipofectamineTm2000介导,将PC53-SN3质粒和空载体质粒PCMV-Neo-Bam转染至XWLC-05细胞中。3.DNA损伤剂阿霉素200ng/ml处理细胞,Western blotting分析阿霉素处理前后p53、p21蛋白表达变化,判断细胞p53基因功能状态。4.集落形成实验测定细胞剂量存活分数,采用线性二次函数模型（L-Q模型）和单击多靶模型拟合细胞辐射剂量存活曲线,分别求出放射生物学参数。5.在集落克隆形成实验的同时,各组细胞在2Gy照射48h后,同时设0Gy母本细胞XWLC-05作为周期分析的对照组,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期时相变化。【研究结果】1. PC53-SN3质粒携带野生型p53基因,PC53-SN3质粒和空载体质粒PCMV-Neo-Bam满足实验要求。2.以LipofectamineTM2000介导,将野生型p53质粒（PC53-SN3）和空载体质粒（PCMV-Neo-Bam）成功地转染到XWLC-05中,野生型p53质粒转染效率为4～6/2×105个细胞,空载体质粒转染效率10～15个／2×105个细胞。转染细胞分别命名为XWLC-05-wtp53、XWLC-05-pNeo.3. Western blotting分析表明,转染野生型p53基因后的细胞经阿霉素处理后,p53、p21蛋白表达均上调,细胞获得正常功能的p53基因,XWLC-05细胞p53功能异常。4.集落克隆形成实验测定细胞剂量存活曲线,采用线性二次函数模型（LQ模型）和单击多靶模型拟合细胞辐射剂量存活曲线。XWLC-05、XWLC-05-pNeo、XWLC-05-wpt53在单击多靶模型中D0值分别是2.397、2.295、1.863,Dq值1.035、1.013、0.502, SF2值0.584、0.569、0.422,XWLC-05-pNeo、XWLC-05-wpt53的SER值分别是1.044、1.287。XWLC-05、XWLC-05-pNeo、XWLC-05-wpt53在线性二次函数中a值分别是0.190、0.192、0.330；p值0.032、0.036、0.041；α/β分别是5.938、5.333、8.049；SF2值0.602、0.589、0.439。与母本XWLC-05细胞、转染空载体XWLC-05-pNeo的细胞比较,转染野生型p53基因后,XWLC-05-wpt53 D0、Dq、SF2均减小,α值增大,并且空载体质粒对放射敏感性基本没有影响。5.流式细胞仪分析表明,48h后不同照射剂量下,XWLC-05-wpt53与XWLC-05-pNeo均在照射2Gy时凋亡率达到最高,分别是13.8%,10.5%,辐射剂量增加,细胞凋亡反而减小,与转染空载体的XWLC-05细胞相比,转染野生型P53基因的细胞XWLC-05-wpt53凋亡率高；母本XWLC-05细胞与转染空载体的XWLC-05-pNeo引起G2期阻滞,获得正常p53功能的XWLC-05-wpt53出现G1期阻滞,凋亡增加。【结论】1.宣威肺腺癌XWLC-05细胞p53功能异常,转染野生型p53基因后,XWLC-05细胞获得正常P53功能。2.转染野生型p53基因可以提高p53功能异常的宣威肺腺癌XWLC-05细胞的放射增敏性3.不同剂量照射48h后,三组细胞均在2Gy时凋亡率最高,母本XWLC-05与XWLC-05-pNeo出现G2期阻滞,凋亡减少,放射敏感性下降,而XWLC-05-wpt53出现G1期阻滞,凋亡增加,放射敏感性升高。