精氨酸双糖苷的纯化关键技术优化及生物活性研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghuayu1985
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本文通过单因素试验和正交试验法建立并优化了一种新的AFG分离纯化工艺。实验结果表明,最佳工艺条件为A3B3C2D3,即乙醇和AFG合成液比例为4∶1,醇沉3次,每次搅拌45min后所得到的AFG粗品过4次聚丙烯酰胺柱。本文探讨了AFG对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠模型的保护作用,初步探讨了其治疗急性肝损伤的机制。分为对组、模型组和给药组(50、100、200mg·kg-1),给药组连续灌胃给药7d后模型组和给药组腹腔注射CCl4的花生油溶液造模,空白组腹腔注射花生油。16h后测肝脏和脾脏指数,试剂盒法测血清中丙氨酸转化酶(ALT)和天冬氨酸转化酶(AST)水平;比色法测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;取肝脏组织进行组织病理学观察;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达水平;蛋白质印迹法(Western Blot)检测肝脏组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白表达水平。结果表明,给药组能降低模型小鼠的肝脏和脾脏指数,降低血清中ALT和AST的活性,降低肝脏中的MDA含量,提高肝脏组织中SOD的水平;组织学切片病理现象得到改善;降低肝脏组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA和蛋白表达水平。证明了AFG对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠的肝脏具有保护作用,其机制可能与TNF-α、IL-1β和IL-6的基因和蛋白表达有关。本文初步探讨了AFG对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制增殖和促进凋亡作用。用CCK-8法检测了AFG对B16细胞的毒性,筛选了最佳给药浓度;比色法检测各组B16细胞的乳酸脱氢酶(LDH)含量;Hoechst 33258荧光染色法观察了AFG对B16细胞的促凋亡情况;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测B16细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达水平;蛋白质印迹法(Western Blot)检测B16细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达水平。结果表明,AFG给药浓度在50、75、100μmol/L时可B显著抑制B16细胞增殖;显微镜下观察,各个给药组B16细胞凋亡数量明显增加;各给药组B16细胞内Bcl-2的m RNA和蛋白水平明显下降,Bax和Caspase-3的m RNA和蛋白表达水平显著升高。初步证明了AFG对B16细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因和蛋白表达有关。
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