【摘 要】
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[目 的]1.从云南绿升麻（C.foetida）根茎中提取、筛选出一种新的对巨噬细胞及其表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN）和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）具有活性的三萜类化合物。2.研究该化合物对巨噬细胞生物学行为及巨噬细胞中EMMPRIN
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[目 的]1.从云南绿升麻（C.foetida）根茎中提取、筛选出一种新的对巨噬细胞及其表达的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN）和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）具有活性的三萜类化合物。2.研究该化合物对巨噬细胞生物学行为及巨噬细胞中EMMPRIN和MMPs（MMP-2、MMP-9、MMP-14）表达的影响,并初步探索其作用机制。通过该研究为今后开发新型抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）和稳定动脉粥样斑块的新型药物奠定前期基础。[方 法]1.使用高效液相色谱法提取、分离云南绿升麻根茎的有效活性成分。2.使用核磁共振光谱法、X射线晶体结构分析等方法确定新化合物Yunnanterpene G 的构型。3.利用PMA诱导THP-1细胞分化为人巨噬细胞,流式细胞学鉴定巨噬细胞。4.MTT法测定Yunnanterpene G对巨噬细胞存活率的影响。5.细胞划痕实验测定Yunnanterpene G对巨噬细胞迁移的影响。6.Trizol法提取巨噬细胞总RNA,RT-qPCR测定Yunnanterpene G对巨噬细胞EMMPRIN和MMPs的mRNA表达水平的影响。7.Western Blot 测定 Yunnanterpene G 对巨噬细胞 EMMPRIN 和 MMPs 的蛋白表达水平的影响。8.构建shRNA腺病毒载体抑制EMMPRIN的表达。研究抑制EMMPRIN表达对巨噬细胞迁移的影响,对巨噬细胞中EMMPRIN、MMPs、TIMP-1的mRNA表达水平的影响。9.Western Blot初步探索Yunnanterpene G影响巨噬细胞可能的信号通路。10.统计方法:每组实验重复3次以上,用SPSS 22.0进行统计分析;计数资料以整数表示;计量资料以均数±标准差表示;数据的分析使用Student’s t-检验,以P<0.05 为差异有统计学意义。（*）P<0.05;（**）P<0.01;（***）P<0.001 差异具有显著统计学意义。[结 果]1.首次从云南绿升麻干燥根茎中分离出一种具有活性的新型三萜类化合物并命名为“Yunnanterpene G”。2.Yunnanterpene G是含有六环骨架的高度氧化的9,19-环阿尔廷型三萜化合物,分子式为C30H44O6。3.Yunnanterpene G可抑制巨噬细胞的迁移而不影响细胞存活率。4.Yunnanterpene G呈浓度依赖型抑制巨噬细胞EMMPRIN和MMPs（MMP-2、MMP-9 和 MMP-14）的 mRNA 表达（P<0.05）。5.Yunnanterpene G呈浓度依赖型抑制巨噬细胞EMMPRIN和MMPs（MMP-2、MMP-9 和 MMP-14）的蛋白表达（P<0.05）。6.抑制巨噬细胞EMMPRIN表达可抑制巨噬细胞迁移,上调TIMP-1的mRNA表达,下调 MMPs（MMP-2、MMP-9 和 MMP-14）的 mRNA 表达（P<0.05）。7.NF-κB和p38 MAPK信号通路可能参与了 Yunnanterpene G对巨噬细胞的调节作用。[结 论]1.首次从云南绿升麻根茎中提取、筛选出一种具有活性的新型三萜类化合物Yunnanterpene G。2.Yunnanterpene G可抑制巨噬细胞迁移,抑制EMMPRIN表达从而下调MMPs（MMP-2、MMP-9、MMP-14）的表达,可能在稳定动脉粥样斑块中发挥作用。
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