薇菜多糖结构初步分析及抗氧化特性研究

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目的:薇菜是一种重要的林副特产和药食同源食物,具有较高的经济运用价值,目前对薇菜的利用多是做成薇菜干供人们当作菜肴食用,对其药用价值和功能性成分的探索不够深入。故本课题主要对来自于恩施地区特产薇菜中功能成分多糖进行研究,分析薇菜多糖的初步结构特征、抗氧化活性及抗氧化稳定性,并建立时间温度动力学方程。方法:采用热水提取乙醇醇沉方法提取薇菜多糖并进行分级醇沉,采用苯酚-硫酸法、刚果红实验、紫外光谱、红外光谱、HPLC对薇菜多糖的结构进行了鉴定,分别利用ABTS法、化学发光法、ORAC法测分级醇沉的薇菜多糖对ABTS+·、超氧阴离子自由基的清除能力以及氧自由基清除能力ORAC值,探讨分级醇沉多糖的抗氧化活性,建立动力学方程,探讨了薇菜多糖抗氧化的稳定性。结果:用水提醇沉法、Sevage法提取纯化得到薇菜粗多糖,经20%、30%、40%体积分数乙醇醇沉得到POJT1、POJT2、POJT3三种多糖,三种多糖糖醛酸含量较高。刚果红实验得出POJT1、POJT2两组分均含有三螺旋结构,POJT3中不含三螺旋结构。分子量测定POJT1具有一个色谱峰,相对分子量为10971.1Da,POJT2有两个色谱峰,相对分子量分别为279799.0Da和12601.4Da,POJT3有一个色谱峰相对分子量为12337.2Da;采用ABTS、化学发光法、ORAC三种不同机理的抗氧化方法来综合评价POJT1,POJT2,POJT3的抗氧化能力,三组分多糖均对ABTS+·、O2-·、AAPH产生的自由基有清除作用。在ABTS体系中三组分多糖对ABTS+·的清除能力具有剂量效应关系,其清除自由基的能力POJT2最强,POJT1次之,POJT3最弱。在化学发光体系中,POJT1,POJT2对超氧阴离子的抑制能力也具有剂量效应关系,但POJT3受质量浓度影响不大。在ORAC体系中,抗氧化活性POJT2最强,POJT2>POJT3>POJT1;在时间动力学探讨中,以电子转移为主的抗氧化体系随多糖质量浓度增加清除ABTS+·能力增加,各浓度间反应达到平衡的时间具有差异,准二级反应动力学较好地拟合了多糖清除ABTS+·的动力学过程。温度对三种多糖清除ABTS+·有一定影响,POJT1、POJT3随着处理温度的增大,清除ABTS+·反应速率k增大,半衰期减小,反应速率k100℃>k80℃>k60℃>k40℃,半衰期t1/240℃>t1/260℃>t1/280℃>t1/2100℃,POJT2的反应速率在80℃时最小,半衰期在80℃时最大,其反应速率k60℃>k40℃>k100℃>k80℃,半衰期t1/2(80℃)>t1/2(100℃)>t1/2(40℃)>t1/2(60℃)。另外,红外光谱分析显示POTJ具有多糖的特征吸收峰,通过PMP衍生结合HPLC分离初步判断POJT中可能含有葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖醛酸、木糖、岩藻糖等单糖组分。结论:通过分级醇沉得到的三种薇菜多糖都是含有较高糖醛酸的多糖,三种多糖在ABTS、ORAC、化学发光体系中均表现出抗氧化活性,但不同体系之间抗氧化活性存在差异,这可能是受蛋白质、糖醛酸、分子量以及多糖结构等因素的影响;三种多糖的抗氧化活性受多糖浓度和处理温度的影响,在温度动力学研究中多糖各浓度之间活化能Ea具有明显差异,可能是在温度的影响下其内部结构发生了不同的改变,具体机理有待更深入地研究。薇菜多糖主要组分中可能含有甘露糖、半乳糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖、岩藻糖、木糖等单糖组分,另外还有3种未知组分有待进一步研究分析。
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