研究背景:多发性硬化症（MS）是一种以中枢神经系统（CNS）炎性细胞浸润和脱髓鞘为主要病理特征的自身免疫性疾病,目前尚无有效治疗手段。本课题组多年的研究证实旋转磁场（RMF）可以明显缓解神经损伤、疼痛以及炎症疾病的发展进程。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是MS的经典临床前药效评估的动物模型,具有与MS相似的免疫及病理特点。本项目拟采用EAE小鼠疾病模型观察旋转磁场能否够延缓EAE的发病进程,并进一步阐述RMF缓解EAE的分子机制。材料与方法:采用MOG35-55肽段免疫诱导建立EAE小鼠模型,在免疫后第1天开始,用RMF（0.2 T,4 Hz）同步进行治疗。每天检测小鼠的体重和进行疾病评分,动态评估疾病的发展情况及磁场作用效果。在第10天时取脾细胞和淋巴结细胞进行MOG特异性淋巴细胞增殖实验,来评估RMF对淋巴细胞特异性增殖的影响。在发病高峰期时处死小鼠,将脊髓、脾脏和淋巴结取出进行后续的实验。采用全转录组学测序技术分析不同实验组脊髓组织中基因差异表达情况;脊髓切片进行HE染色来评估炎性细胞浸润状态和LFB染色观察脱髓鞘程度;采用流式细胞术检测不同实验组脾和淋巴结细胞中CD4+细胞和CD8+细胞的比例和CD4+细胞的亚型的变化;采用ELISA、RT-PCR和免疫荧光技术分别检测和验证相关趋化因子和细胞因子的表达情况。实验结果:1、成功构建MOG诱导的EAE小鼠模型:采用RMF持续处理20天后,可以明显减缓EAE小鼠的体重减轻、减低疾病评分以及疾病的发病率。2、EAE小鼠运动能力实验表明:持续的RMF处理可明显提高EAE小鼠的运动能力（与EAE组相比,P<0.05）,但尚未恢复至正常水平（与Sham组相比,P<0.001）。3、脊髓组织全转录组测序发现:RMF主要作用在EAE小鼠的免疫系统,并且差异基因主要集中以下途径:细胞因子-细胞因子受体相互作用,Th17细胞分化,抗原加工和呈递,Th1和Th2细胞分化等信号通路系统。但是RMF暴露对MOG刺激的淋巴细胞特异性增殖几乎没有影响。4、RMF对EAE小鼠外周淋巴组织的影响:RMF处理后EAE小鼠的外周淋巴组织肿大,与EAE组相比,差异非常显著（P<0.001）,脾淋巴细胞计数结果显示EAE小鼠脾脏和淋巴结总淋巴细胞和CD4+T细胞绝对数量显著增加（与EAE组相比,P<0.05）,通过流式细胞术结果显示CD4+T细胞比例下降（与EAE组相比,P<0.01）,EAE小鼠的脊髓切片也显示CD4+细胞显著减少（与EAE组相比,P<0.001）。5、RMF对EAE小鼠外周淋巴细胞迁移的影响:全转录组测序和RT-PCR结果均显示:RMF处理下调EAE小鼠脊髓中CCL-2,CCL-3和CCL-5的表达（与EAE组相比,P<0.05）。同时RMF处理也下调了EAE小鼠中CXCL-1、CXCL-2、CXCL-9和CXCL-10的表达（与EAE组相比,P<0.05）。6、磁场对EAE小鼠CD4+T细胞亚群的影响:RMF处理增加EAE小鼠脾脏和淋巴结的调节性T（Treg）细胞的比例（与EAE组相比,P<0.01）,测序和RT-PCR结果显示RMF处理明显上调EAE小鼠的Foxp3和TGF-β的表达（与EAE组相比,P<0.05）。RMF处理抑制EAE小鼠的Th1（与EAE组相比,P<0.01）和Th17（与EAE组相比,P<0.05）细胞亚群的比例,测序和RT-PCR结果显示磁场明显下调EAE小鼠Rorc（与EAE组相比,P<0.01）和T-bet（与EAE组相比,P<0.05）的基因表达。7、RMF对EAE小鼠免疫因子产生的影响:外周血细胞因子检测实验表明RMF处理明显降低EAE小鼠外周血中的IFN-γ和IL-17A的含量（与EAE组相比,P<0.05）,但是对其他细胞因子未见明显影响。脊髓切片结果显示RMF处理导致EAE小鼠的IFN-γ+细胞（与EAE组相比,P<0.05）和IL-17+细胞（与EAE组相比,P<0.001）显著下降。同时RMF处理显著抑制EAE小鼠骨髓CD4、IFN-γ和IL-17的表达（与EAE组相比,P<0.05）。结论:实验结果表明RMF（0.2 T,4 Hz）治疗对EAE疾病进展具有预防作用,包括降低疾病的严重程度和延缓疾病的发作。RMF暴露对MOG刺激的淋巴细胞特异性增殖几乎没有影响。可能的机制是RMF通过抑制CD4+T细胞向脊髓的迁移并改善treg细胞和Th1/Th17细胞之间的失衡而改善EAE疾病。作为一种温和的物理疗法,RMF可能成为临床治疗MS的有效干预手段,明显改善预后及生活质量。