论文部分内容阅读
目的：氨肽酶N（Aminopeptidase N，APN）是一种锌离子依赖性的外肽酶，1989年被发现与CD13为同一蛋白。APN/CD13最早被作为髓系造血干细胞的标志物，近年来却相继报道，其在多种肿瘤细胞表面高表达，参与细胞外基质降解、血管形成和肿瘤的侵袭转移。同时，关于APN抑制剂的相关研究也逐步开展，报道显示联合应用APN抑制剂辅助治疗恶性肿瘤，可抑制肿瘤侵袭转移，诱导肿瘤细胞凋亡，延长肿瘤患者生存期。本实验通过检测APN在乳腺癌组织中的表达情况，明确其与乳腺癌临床病理特征之间的关系；通过比较APN表达与血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor， VEGF）、基质金属蛋白酶-2（matrixmetalloproteinase-2，MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的关系，探讨APN在乳腺肿瘤血管生成、侵袭转移过程中所起的作用；同时检测淋巴结转移灶中APN的表达情况，来探讨APN在乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶中的表达是否一致。为以APN为靶点的相关药物在中国人群中的应用进行前期探索。方法：1.收集手术后经病理证实的乳腺癌石蜡标本60例，并取其中伴有同侧腋淋巴结转移灶的转移癌石蜡标本共26例，乳腺癌旁正常乳腺组织石蜡标本20例，采用免疫组织化学技术（SP法）检测APN在乳腺癌、癌旁正常乳腺组织、腋淋巴结转移癌中的表达，同时检测MMP-2、MMP-9在乳腺癌组织中的表达。2.收集经术后病理证实的乳腺癌新鲜标本20例和正常乳腺新鲜标本10例，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测APN mRNA的表达情况。3.统计学处理：χ~2检验，秩和检验，spearman相关分析，检验标准为P＜0.05有统计学意义，所有数据应用SPSS13.0统计软件处理。结果：1.免疫组化结果显示，乳腺癌组织中APN蛋白主要表达于肿瘤细胞的细胞膜，多呈浅黄色或棕黄色。同时可见乳腺癌组织内新生血管内皮着色，呈黄棕色，而癌旁正常组织血管内皮无着色。APN在乳腺癌上的阳性表达率为36.7%（22/60），癌旁正常乳腺组织未见APN表达（0/20），乳腺癌上APN阳性表达率明显高于癌旁正常乳腺组织（χ~2=10.115，P=0.001）。2.60例乳腺癌组织中，APN蛋白在乳腺肿瘤细胞上的表达情况与病理类型有关，APN蛋白在浸润性导管癌组的阳性表达率为45.2%（19/42），高于其它病理类型组阳性表达率16.7%（3/18）（χ~2=4.429，P=0.035）。而APN蛋白在乳腺肿瘤细胞上的表达情况与绝经状况、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、淋巴结转移情况无关（P＞0.05）。相关性分析显示，APN蛋白在乳腺肿瘤细胞上的表达水平与ER、PR、Her-2等指标无相关性（P＞0.05）。3.MMP-2、MMP-9蛋白阳性染色主要定位于细胞浆，多呈棕黄褐色颗粒状，在乳腺癌上的阳性表达率分别为75.0%（45/60）、76.7%（46/60）。MMP-2阳性组和MMP-2阴性组APN阳性表达率分别为33.3%（15/45）、46.7%（7/15），两组APN阳性表达率无统计学差异（χ~2=0.861，P=0.353）。MMP-9阳性组和MMP-9阴性组APN阳性表达率分别为39.1%（18/46）、28.6%（4/14），两组APN阳性表达率无统计学差异（χ~2=0.515，P=0.473）。相关性分析显示，乳腺癌组织APN的表达与MMP-2、MMP-9的表达无相关性（rs=-0.113，P=0.390；rs=0.076，P=0.566）。4.60例乳腺癌患者资料数据显示，VEGF在乳腺癌上的阳性表达率为78.3%（47/60）。VEGF阳性组与VEGF阴性组APN阳性表达率分别为44.7%（21/47）、7.7%（1/13），VEGF阳性组APN阳性率高于VEGF阴性组（χ~2=4.512，P=0.034）。相关性分析显示，乳腺癌组织APN与VEGF的表达两者无相关性（rs=0.078，P=0.553）。5.有同侧腋淋巴结转移癌的乳腺癌患者26例，26例乳腺癌原发灶标本中，APN在肿瘤细胞阳性表达率为38.5%（10/26），高于淋巴结转移灶阳性表达率11.5%（3/26）（χ~2=5.026，P=0.025）。原发灶和淋巴结转移灶APN表达无相关性（rs=-0.277，P=0.171）。6.用RT-PCR法进一步检测乳腺癌APN mRNA的表达情况，显示，乳腺癌组织中APN mRNA表达水平高于正常乳腺组织，两组间存在明显差异（Z=-2.376，P=0.018）。结论：1.APN在乳腺癌组织中的表达高于正常乳腺组织，其表达提示预后不良。2.APN参与乳腺癌的发生发展，其与VEGF可能存在一定的协同作用。3.APN在乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶中的表达不一致。