【摘 要】
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目的:本研究从AS炎症反应出发,从体内实验和体外实验探讨补阳还五汤抗AS炎症的作用及其机制,明确苷类组分抗AS中的药理作用及其作用机制,为中医药防治AS提供依据,同时也为中药复方及新型组分中药的研究提供新思路。方法:（1）采用ApoE-/-小鼠AS模型,利用全自生化分析仪、HE染色、ELISA、免疫荧光、免疫组织化学、Western-blot法,测量血脂水平、主动脉内膜厚度、炎症因子及粘附分子的含
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目的:本研究从AS炎症反应出发,从体内实验和体外实验探讨补阳还五汤抗AS炎症的作用及其机制,明确苷类组分抗AS中的药理作用及其作用机制,为中医药防治AS提供依据,同时也为中药复方及新型组分中药的研究提供新思路。方法:（1）采用ApoE-/-小鼠AS模型,利用全自生化分析仪、HE染色、ELISA、免疫荧光、免疫组织化学、Western-blot法,测量血脂水平、主动脉内膜厚度、炎症因子及粘附分子的含量,评价药物抗AS炎症反应的作用。（2）通过网络药理学及分子对接预测补阳还五汤苷类组分干预AS的潜在作用靶点。采用Western-blot及droplets digital PCR方法,测量JAK/STAT通路相关蛋白及m RNA表达水平,进行体内实验验证。（3）采用巨噬细胞泡沫化模型,利用油红O染色、生化试剂盒、ELISA、Western-blot及droplets digital PCR方法,检测细胞泡沫化程度、细胞内胆固醇含量、炎症因子含量、JAK/STAT通路相关蛋白及m RNA表达水平,评价药物AS炎症反应作用机制。结果:（1）ApoE-/-小鼠高脂饲料连续喂养12周后成功建立AS模型。与对照组比较,模型组小鼠血浆中TC、TG、LDL-c含量显著升高（P＜0.01）,血管内膜增厚（P＜0.01）,炎症因子TNF-α、IL-6和粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-selection含量增加（P＜0.01）;与模型组相比,苷高剂量组显著降低小鼠血浆中TC、TG、LDLc含量（P＜0.001）,减轻斑块面积和厚度（P＜0.01）,减少炎症因子TNF-α、IL-6和粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-selection的表达（P＜0.01）,且作用与补阳还五汤一致（P＞0.05）。（2）网络药理学结果显示,补阳还五汤苷类组分抗AS炎症反应与JAK/STAT通路相关;分子对接显示补阳还五汤苷类组分（黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷）配体能分别与JAK2、STAT1、STAT3蛋白受体结合;体内实验结果表明,与对照组比较,模型组小鼠JAK2、STAT1及STAT3蛋白及m RNA表达显著增加（P＜0.01）,与模型组相比,苷高剂量组抑制JAK2、STAT1、STAT3蛋白及m RNA表达（P＜0.01）。（3）75μg/m L Ox-LDL刺激巨噬细胞24小时成功建立泡沫细胞模型。与对照组相比,模型组细胞内胆固醇含量显著增加（P＜0.001）,炎症因子TNF-α、IL-6含量升高（P＜0.01）,JAK2、STAT1、STAT3蛋白磷酸化及相关m RNA的表达增加（P＜0.01）;与模型组比较,苷中剂量组减少泡细胞数量与细胞内胆固醇含量（P＜0.01）,显著降低炎症因子TNF-α、IL-6的含量（P＜0.001）,减少JAK2、STAT1和STAT3蛋白磷酸化及相关m RNA的表达（P＜0.01）。STAT3蛋白磷酸化激活后,与模型组相比,抑制剂组炎症因子TNF-α、IL-6含量减少（P＜0.01）,激动剂组炎症因子TNF-α、IL-6含量增加（P＜0.001）。与激动剂组相比,激动剂+原方组及激动剂+苷类组分组可显著降低炎症因子TNF-α、IL-6含量（P＜0.01）。结论:苷类是补阳还五汤抗AS的主要有效物质,介导JAK/STAT通路,减轻炎症反应,发挥补阳还五汤抗AS炎症的作用。
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