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本研究目的是建立实时定量PCR (RQ-PCR)快速检测血标本中白念珠菌(Candida albicans,亦称白色假丝酵母菌)DNA的方法,并对临床标本进行初步检测,同时利用RQ-PCR方法建立快速检验白念珠菌在YPD液体培养基和健康人全血中对抗生素敏感性的方法。论文第一部分,选择白念珠菌基因组单拷贝基因NAG1作为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,建立RQ-PCR反应体系,并用QIAamp(?) DNA Blood Mini Kit提取白念珠菌基因组DNA。构建特异性质粒做标准品,做方法学分析,并对37例外科发热患者的血标本进行临床验证。结果显示特异性好,检测限为100拷贝/1μl上机检测液(每反应)；仪器检测灵敏度为97.46%,特异度为100%；标准曲线线性关系好,R2在0.9918～0.9985之间；不同浓度的白念珠菌样本检测的平均准确性为99.64%±2.08%；批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为14.76%±2.64%和17.85%±3.53%；模拟血标本中白念珠菌DNA平均提取效率为88.60±5.73%,提取效率平均变异系数为11.70%±5.36%；模拟血标本阳性率为100%,临床血标本阳性率为2.7%,明显高于血培养(均阴性)。显示RQ-PCR可用于定量检测全血标本中白念珠菌DNA的含量。论文第二部分,对37例外科发热患者的74份血标本进行了RQ-PCR检测；2个标本检测到白念珠菌DNA,呈阳性,阳性率为2.7%,含量约3.79×103-4.42×103CFU/ml,所有患者的血培养结果均为白念珠菌阴性。第三部分,在含有相同浓度白念珠菌的YPD培养基和健康人全血中,加入不同的抗生素,并设立生长对照,同样条件下培养1、2、4、6和8小时后提取标本的基因组DNA,以白念珠菌特异的NAG1基因的引物和TaqMan探针对标本进行RQ-PCR检测。观察不同组的生长曲线,来判定药敏结果,并与常规纸片法进行比较,结果显示RQ-PCR检测结果和常规纸片法一致,但更快速。综合研究结果显示,RQ-PCR技术不仅可用于定量检测患者血中的白念珠菌,检出率及速度高于常规血培养；同时可用于对血中的白念珠菌进行快速、准确的药物敏感性试验。