第一部分氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠联合诱导小鼠炎症相关性肠癌模型的建立背景：慢性炎症是肿瘤形成、发展的重要因素,其中炎症性肠病是结直肠癌发生的高危因素,成为近年来肿瘤研究中的热点。由于病程漫长、涉及多种机制不明的细胞因子参与,目前诱导炎症相关性肠癌模型的方法仍不成熟。目的：用氧化偶氮甲烷(Azoxymethane, AOM)及葡聚糖硫酸钠(Dextran Sodium Sulfate, DSS)联合诱导建立小鼠炎症相关性肠癌模型,为后续实验提供基础,同时探讨肠道炎症向恶性肿瘤发展过程中的免疫机制。方法：30只雄性Balb/c小鼠随机分为A-E组：对照组(A组)、AOM单药组(B组)、DSS单药组(C组)、AOM/DSS (?)(?)剂量组(D组)、AOM/DSS高剂量组(E组)。A组自由饮水进食；B组以10 mg/kg剂量腹腔注射AOM后自由饮水进食；C组以3%DSS用7天,停14天,循环4程；D组以10 mg/kg剂量腹腔注射AOM,后3%DSS用7天,停14天,循环4程；E组以20 mg/kg剂量腹腔注射AOM,后3%DSS用7天,停14天,循环4程。所有小鼠于12周末处死。观察小鼠一般情况、体重、疾病活动指数和结肠长度变化。小鼠结肠组织HE (Hematoxylin and Eosin stain, HE)染色并根据组织损伤评分以确定结肠组织学变化。药物对肝脏的损伤程度采用肝脏组织HE染色及网状纤维染色判断,并用生化分析仪检测血清肝功能指标(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素、羟脯氨酸、清蛋白)。用免疫组化法及半定量计数法检测结肠组织中NF-κBp65、TLR2、TLR4的表达情况。用酶联免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清中Thl型细胞因子(TNF-α, IL-6)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)、炎症活动及血管新生指标(TGF-β1、VEGF)的含量。结果：与对照组小鼠相比,DSS组、AOM/DSS低剂量组、AOM/DSS高剂量组均出现明显的结肠炎症表现,主要表现为一般情况差,有腹泻、便血、脱肛,体重增长缓慢(P<0.05)、疾病活动指数明显升高(P<0.05)、结肠长度明显变短(P<0.05)、以及HE染色组织损伤评分明显升高(P<0.05),其中AOM/DSS低剂量组结肠见2枚隆起型组织(2/6只小鼠检出肿瘤病灶),经病理证实为结肠腺癌,每只小鼠均有多处不典型增生灶。AOM/DSS高剂量组结肠见1枚隆起型组织(1/6只小鼠检出1个肿瘤病灶),病理证实为结肠腺癌。余分组未发现恶性肿瘤组织。肝脏组织HE染色及网状纤维染色提示AOM、DSS、以及两药联用均会使肝细胞产生不同程度的坏死,并出现纤维化表现。血清生化检测提示AOM/DSS f(?)、高剂量组较对照组相比,肝功能指标出现异常：谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素、羟脯氨酸明显升高,清蛋白明显降低(P<0.05)。免疫组化半定量计数提示DSS组、AOM/DSS低剂量组、AOM/DSS高剂量组较对照组相比,结肠组织中NF-κBp65、TLR2、TLR4的表达均有升高(P<0.05)。ELISA提示AOM组、DSS组、AOM/DSS(?)(?)剂量组、AOM/DSS高剂量组较对照组相比,血清细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-4、1L-10、TGF-β1、VEGF)的含量均显著升高(P<0.05)。结论：本研究提示,低剂量的AOM/DSS可诱导小鼠炎症相关性肠癌的发生。AOM/DSS联合诱导肠癌模型的过程中,小鼠的肝脏功能受到不同程度的损伤。该实验证实了,在炎症向恶性肿瘤发展的过程中,多种细胞因子的表达发生变化。Toll样受体和NF-κB在炎症相关性肠癌的形成、发展过程中可能起到促进作用。第二部分TLR2mAb、TLR4mAb阻断AOM/DSS联合诱导小鼠炎症相关性肠癌的形成背景：炎症性肠病是炎症相关性肠癌的发病基础。在第一部分的实验中我们可以看到,NF-κB在炎症相关性肠癌的形成、发展过程中可能起到促进作用。NF-κB可通过多种途径被激活,其中一个上游激活途径是Toll样受体。Toll样受体(Toll-like Receptors, TLRs)是一类Ⅰ型跨细胞膜受体,其中TLR2和TLR4与宿主肠粘膜天然免疫反应有密切关系。TLRS/NF-κB信号转导途径在炎症相关性肠癌中的作用仍不明确,需要进一步研究。目的：探讨TLR2、TLR4在炎症相关性肠癌发生过程中的作用及其潜在治疗靶点的可能方法：根据第一部分的实验结果,用低剂量的AOM及DSS联合诱导建立小鼠炎症相关性肠癌模型。用Toll样受体2、Toll样受体4的单克隆抗体共同进行干预。观察小鼠一般情况、体重、疾病活动指数和结肠长度变化。行结肠组织HE(Hematoxylin and Eosin stain, HE)染色并根据组织损伤评分以确定结肠组织学变化。行肝脏组织HE染色及网状纤维染色来了解单抗对肝脏损伤的保护作用,并用生化分析仪检测血清肝功能指标(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素、羟脯氨酸、清蛋白)。用免疫组化法及半定量计数法检测结肠组织中NF-κB p65、TLR2、TLR4的表达情况。用酶联免疫法(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清中Th1型细胞因子(TNF-α、IL-6)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)、炎症活动及血管新生指标(TGF-β1、VEGF)的含量。结果：与模型组小鼠相比,单抗干预组小鼠结肠炎症表现明显缓解,用药后腹泻、便血、脱肛较之好转,体重增长加快(P<0.05)、疾病活动指数明显降低(P<0.05)。大体解剖提示,单抗干预组小鼠结肠长度较长(P<0.05)。结肠组织HE染色提示肠粘膜组织损伤评分明显降低(P<0.05),病理未见恶性肿瘤或不典型增生表现。肝脏组织HE染色及网状纤维染色提示单抗干预组小鼠肝细胞坏死程度及纤维化程度较轻。血清生化检测提示单抗干预后,肝功能指标谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶显著降低(P<0.05),而总胆红素、羟脯氨酸、清蛋白无明显统计学差异(P>0.05)。免疫组化半定量计数提示结肠组织中NF-κBp65、TLR2、TLR4的表达较模型组均有降低(P<0.05)。ELISA提示血清Thl型细胞因子(TNF-a、IL-6)、Th2型细胞因子(IL-4、IL－10)、炎症活动及血管新生指标(TGF-β1、VEGF)的含量均较模型组显著降低(P<0.05)。结论：TLRs/NF-κB信号转导途径在慢性炎症和肿瘤的发生中起着重要的调节作用。Toll样受体2、Toll样受体4单克隆抗体阻断TLRs有助于恢复Th1/Th2细胞因子平衡,可以阻断小鼠炎症相关性肠癌的发生。Toll样受体2、Toll样受体4单克隆抗体对肝脏的损伤具有保护作用。