白芸豆中减肥药物α-淀粉酶抑制剂的提纯及其性质研究

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α-淀粉酶抑制剂(α—AI)是一种糖苷水解酶抑制剂。从白芸豆中分离纯化的α-淀粉酶抑制剂在医药及农业生产等方面具有广泛地实用价值,尤其在减肥和治疗糖尿病方面有突出的优点。本文以白芸豆为原料,以α-淀粉酶抑制剂为研究对象,设计实验对白芸豆中α淀粉酶抑制剂的提取、分离纯化以及其性质、提取下脚料豆渣的综合利用等进行了相应的研究,并取得了以下成果:1.确定了对白芸豆中分离纯化的α-淀粉酶抑制剂的DNS比色法最佳条件,作为α-淀粉酶抑制剂活性测定的实验分析方法;2.在单因素试验的基础上进行L9(34)正交试验,确定最佳浸提工艺条件为:取过60目筛的白芸豆籽粒粉碎原料100g,按料液比(W/V)1:6加入1.5%NaCl溶液浸提过夜,离心(10 OOOrpm,20min 4℃)取上清70℃水浴15min,冷至室温后离心,上清液加70%乙醇4℃醇沉。并进行验证,α-淀粉酶抑制剂粗品抑制活性均值65%(n=3);3.对浸提工艺获得的α-淀粉酶抑制剂粗品进行DEAE-Cellulose离子交换树脂柱层析洗脱,获得α-淀粉酶抑制剂样品得率0.37%,抑制活性79.3%;Sephadex G-75凝胶柱层析进一步分离纯化,α-淀粉酶抑制剂产品,得率0.12%,抑制活性90.4%;4.采用PAGE凝胶电泳的考马斯亮蓝染色和麝香草酚法染色,以及Sepharose CL-6B凝胶柱层析,结果表明白芸豆α-淀粉酶抑制剂样品的相对分子量为36kD,且为结构均一的糖蛋白,与文献报道基本吻合;5.分别采用Lowry法(又称Folin-酚试剂法)和苯酚-硫酸法对样品蛋白质和多糖的含量进行测定。参照相应的标准曲线,可得出白芸豆α-淀粉酶抑制剂样品的蛋白质含量为86.7%,多糖含量为13.3%。6.白芸豆中α-淀粉酶抑制剂样品对温度、pH、预温时间的稳定性研究结果显示α-淀粉酶抑制剂耐热性较高,具有很高的应用价值;当pH4.5时抑制活性相对最大;7.白芸豆α-淀粉酶抑制剂对哺乳动物α-淀粉酶有抑制活性,但对微生物的α淀粉酶无抑制活性。体现了白芸豆α-淀粉酶抑制剂的抑制特异性;8.研究了使用豆渣制备膳食纤维的最佳提取工艺条件,提取得可溶性膳食纤维(SDF)的含量为37.8%,并对所制得的SDF进行了一系列的品质测定。
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