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目的: 本研究旨在耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis，M.smegmatis）中表达与纯化甲基化肝素结合血凝素蛋白(methylated heparin-binding haemagglutininadhesin，mHBHA)，研究mHBHA在鉴别诊断潜伏结核感染(latent tuberculosisinfection，LTBI)和活动性结核病(active tuberculosis，ATB)中的价值，以及评估mHBHA在结核病血清学诊断中的价值。 方法: 1、利用PCR方法从Mycobacterial tuberculosis(M.tb) H37Rv基因组中扩增HBHA编码基因，克隆到分枝杆菌穿梭表达质粒pMFA41中，构建pMFAH41原核表达质粒，然后将重组质粒电转化M.smegmatis表达，并通过Ni2+亲和层析柱加以纯化，对其特异性及其甲基化修饰进行鉴定。 2、将纯化好的mHBHA蛋白通过体外IFN-γ酶联免疫斑点技术(enzyme-linkedimmunospot assay，ELISPOT)对86例ATB（其中菌阳结核36例，菌阴结核50例）、15例LTBI、37例健康体检者(healthy control，HC)的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)进行检测，以ESAT-6/CFP-10/Rv3615c多肽库作为对照抗原。 3、收集49例肺结核(pulmonary tuberculosis，PTB)、21例肺外结核(extrapulmonary tuberculosis，EPTB)、16例LTBI、25例HC的血清，用mHBHA包被酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)板，检测血清中mHBHA抗原特异性IgG、IgA抗体水平，以ESAT-6、Ag85A作为对照抗原。 结果: 1、成功构建了pMFAH41重组质粒，表达并纯化了mHBHA，其特异性与甲基化修饰鉴定正确。 2、基于mHBHA为基础的ELISPOT检测结果发现LTBI人群PBMCs分泌IFN-γ的T细胞频数显著高于ATB患者，差异有统计学意义(P＜0.05)，且与病原检出或结核感染方式无关，结果显示无论是菌阳结核与菌阴结核，亦或是PTB与EPTB，都与LTBI人群存在统计学差异，而以ESAT-6/CFP-10/Rv3615c为对照抗原刺激时则没有统计学差异（P＞0.05）。mHBHA检测LTBI的受试者工曲线(receiver-operating characteristic，ROC)的曲线下面积(area under curve，AUC)为0.809(P＜0.0002)，准确性较好，而对照抗原检测LTBI的AUC仅为0.607(P＞0.05)。 3、抗mHBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgG水平PTB组显著高于HC组;mHBHA抗原特异性的IgA水平PTB组显著高于HC组(P＜0.05)，ESAT-6、Ag85A抗原特异性的IgA水平在两组间却无差异（P＞0.05）。ROC曲线分析mHBHA检测PTB的AUC为0.703(P＜0.05)，ESAT-6检测PTB的AUC为0.574（P＞0.05），Ag85A检测PTB的AUC为0.560(P＞0.05)。 结论: 应用mHBHA作为抗原建立的IFN-γELISPOT方法在鉴别诊断潜伏结核感染和活动性结核方面具有潜在的应用价值，尤其对于菌阴结核的快速诊断具有一定的临床意义;而且mHBHA蛋白用于检测肺结核的诊断效能较好，可作为结核病血清学诊断的备选抗原之一。