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大面积的皮肤损伤、烧伤,特别是伴有放射损伤时,创面愈合相对困难。这既与创面修复细胞数量和功能显著下降有关,也与经常伴发的创面感染有关。在我们研究所前期的工作中,我们先后分离了大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cell, dMSCs)和小鼠骨髓间充质干细胞,采用静脉输注或创面局部移植的方法将上述两种细胞移植后,发现它们可显著加快创面愈合速度。但同时我们发现,创面感染仍是影响创面愈合速度的重要因素。人β防御素2(human beta-defensin-2, hBD2)是内源性抗生素肽类大家族的一种,具有广谱高效的抗微生物活性。hBD2抗微生物的机制不同于传统的抗生素,其机制在于它分子表面带正电荷,能够与富含磷脂(带负电荷)的微生物表面结合,形成孔隙或通道,破坏膜的完整性,胞外的离子、多肽等流入胞内,而胞内重要的盐类、大分子等则泄漏到胞外,导致菌体不可逆性死亡,因而不易产生耐药性。上述优点使其在促进感染创面愈合中有着良好的应用前景。但正常情况下,其表达量极低。因此,本研究中,我们首先构建hBD2的腺病毒表达载体,然后将其转染至dMSCs使其高表达hBD2并移植到感染创面,同时发挥hBD2的抗菌效应以及dMSCs的修复作用,以更好地促进创面愈合。主要的方法和结果如下:1. hBD2腺病毒表达载体的构建和鉴定。提取银屑病病人皮损组织总RNA,通过RT-PCR扩增含NotI和HindIII酶切位点hBD2全长cDNA,然后顺序克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV和骨架质粒pAd-Easy中。PacⅠ酶切阳性的重组质粒,通过脂质体法转染293细胞包装出hBD2的腺病毒载体,命名为Adv-hBD2。采用PCR、RT-PCR、细胞免疫荧光组织化学和Western-blot等方法证实,Adv-hBD2可转染dMSCs,并能成功表达hBD2。2. Adv-hBD2转染真皮多能干细胞后表达产物活性鉴定。收集Adv-hBD2转染dMSCs 5d培养上清,并进行过滤、冷冻干燥浓缩及重溶,获得原液、5倍浓缩液和10倍浓缩液等3个不同hBD2浓度梯度的干预液。ELISA测定其浓度分别约为743.6、