目的:研究缬沙坦联合川芎嗪对大鼠VD的治疗效果;初步探讨缬沙坦联合川芎嗪治疗大鼠VD的作用机制。方法:Morris水迷宫筛选学习记忆功能正常的雄性SD大鼠;随机分组法对大鼠进行分组(假手术组、模型组、缬沙坦组、川芎嗪组和缬沙坦联合川芎嗪组);采用2-VO+硝普钠降压法建立大鼠VD模型;每天1次连续灌胃给药,共15天;Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力;腹主动脉取血,冰上匀浆,1500转/分转速离心5分钟制备血浆及海马组织匀浆上清液,化学比色法测定海马组织SOD、iNOS和GSH-Px活性及MDA和NO含量;放射免疫法测定血浆中AngII、AVP、TXB2和6-keto-PGF1α的含量。RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳法测定海马组织IL-1βmRNA的表达;4%多聚甲醛灌注固定,脑组织石蜡包埋,连续冠状切片,HE染色和免疫组织化学染色(SABC法),光镜观察海马组织神经元损伤程度和TNF-α、Bcl-2、Bax的阳性表达,Image pro plus 6.0软件测定TNF-α、Bcl-2、Bax平均光密度。结果:①定位航行实验:模型组大鼠从第三天开始逃避潜伏期由假手术组(32.45±15.39)秒增加到(43.28±18.76)秒(P<0.01);缬沙坦联合川芎嗪用药组大鼠从第四天开始逃避潜伏期由模型组(21.83±9.72)秒缩短为(16.54±7.98)秒(P<0.01);缬沙坦组和川芎嗪组从第四天分别缩短为(18.13±8.92)秒和(18.15±8.59)秒(P<0.05)。空间探索实验:模型组大鼠跨越平台次数,在平台象限停留的时间和在平台象限游程占总游程的百分比分别由假手术组(6.30±2.54)次/120秒,(51.43±10.66)秒和(38.32±8.49)%减为(3.44±1.67)次/120秒,(35.28±9.99)秒和(29.65±6.44)%(P<0.01)。缬沙坦联合川芎嗪用药组大鼠跨越平台次数由模型组(3.44±1.67)次/120秒增加为(5.60±1.90)次/120秒(P<0.05),大鼠在平台象限停留的时间及平台象限游程占总游程的百分比由模型组(35.28±9.99)秒、(29.65±6.44)%增加为(49.74±8.30)秒和(37.07±6.47)%(P<0.05),其它各用药组与模型组比较无统计学意义。②模型组大鼠血浆中AngII和TXB2含量分别由假手术组(125.23±15.49)ng/ml和(1101.07±71.20) ng/ml增加为(175.21±17.95) ng/ml和(1374.84±39.54) ng/ml(P<0.01);AVP和6-keto-PGF1α含量分别由假手术组(150.14±18.38)ng/ml和(754.33±97.86)ng/ml降低为(46.74±10.58)ng/ml和(240.64±23.29) ng/ml(P<0.01)。与模型组比,缬沙坦联合川芎嗪用药组血浆中TXB2含量分别由模型组(1374.84±39.54)ng/ml降低为(1204.53±20.54)ng/ml(P<0.01);AngII、AVP和6-keto-PGF1α含量分别由模型组(175.21±17.95)ng/ml , (69.39±11.96)ng/ml和(240.64±23.29)ng/ml增加为(330.49±18.46)ng/ml,(92.58±16.88)ng/ml和(489.08±72.61)ng/ml(P<0.01,P<0.05);缬沙坦组血浆中TXB2含量降低为(1293.39±35.81)ng/ml(P<0.05),AngII和6-keto-PGF1α含量分别增加为(256.86±30.48)ng/ml和(346.51±48.76) ng/ml(P<0.01,P<0.05);川芎嗪组血浆中TXB2含量降低为(1287.49±40.27)ng/ml(P<0.01),AngII、AVP和6-keto-PGF1α含量分别增加为(231.46±38.34)ng/ml ,(105.57±19.82)ng/ml和(336.01±47.25) ng/ml(P<0.01,P<0.05)。③模型组大鼠海马组织SOD和GSH-Px活性由假手术组(318.35±58.80) U/mgprot和(46.57±12.87)酶活力单位降低为(113.41±58.40)U/mgprot和(16.31±5.76)酶活力单位(P<0.01);MDA、NO的含量和iNOS活性由假手术组(2.94±1.47) nmol/mgprot , (16.12±6.31)μmol/gprot和(2.16±1.43)U/mgprot增加为(7.41±3.92) nmol/mgprot,(33.51±12.00)μmol/gprot和(9.97±3.87) U/mgprot (P<0.01)。与模型组相比,缬沙坦联合川芎嗪用药组大鼠海马组织SOD和GSH-Px活性由模型组(113.41±58.40)U/mgprot和(16.31±5.76)酶活力单位增加为(241.67±80.07)U/mgprot和(37.26±14.51)酶活力单位(P<0.01);MDA、NO含量和iNOS活性由模型组(7.41±3.92) nmol/mgprot ,(33.51±12.00)μmol/gprot和(9.97±3.87) U/mgprot下降为(3.32±1.85)nmol/mgprot , (20.30±12.64)μmol/gprot和(2.47±1.99) U/mgprot(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,缬沙坦组和川芎嗪组可显着提高大鼠海马组织SOD、GSH-Px活性,降低MDA、NO含量和iNOS活性(P<0.05)。④RT-PC半定量观察:海马IL-1βmRNA的表达:电泳结果显示各组748bp处均可见明显的扩增带,为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDHmRNA)扩增条带,在377bp处有强弱不同但边界清楚的条带为IL-1βmRNA的扩增片段。半定量密度分析结果表明:模型组大鼠海马组织IL-1βmRNA由假手术组0.409±0.046增加为0.591±0.048(P<0.01) ;缬沙坦联合川芎嗪用药组大鼠海马组织IL-1βmRNA由模型组0.591±0.048降低为0.530±0.039(P<0.01);其它各用药组与模型组比较无统计学意义。⑤病理组织学观察(HE染色):假手术组海马组织神经元排列整齐,形态完整;细胞数量较多,细胞形态正常,体积较大,核居中,大而圆,染为淡蓝色,核仁核膜清晰,核仁染为紫色,胞质着色浅而均匀。模型组大鼠海马组织神经元排列紊乱,数目减少,胞核固缩浓染。各用药组均能改善上述神经元损伤,使大鼠海马神经元排列较整齐,神经元数目明显增加,使胞浆浓缩,胞核固缩深染现象改善,缬沙坦联合川芎嗪用药组更加显著。⑥免疫组织化学检测:与假手术组相比,模型组大鼠海马TNF-α表达呈强阳性,细胞呈棕黄色,为卵圆形、梭形,大多为胶质细胞;Bcl-2、Bax阳性神经元胞浆有棕黄色物质沉积。与模型组相比,各用药组TNF-α和Bax表达减弱,Bcl-2表达增强。模型组大鼠海马组织TNF-α、Bcl-2、Bax表达分别由假手术组0.116±0.006,0.059±0.009,0.039±0.003增加为0.217±0.008,0.237±0.004和0.253±0.003(P<0.01)。缬沙坦联合川芎嗪用药组大鼠海马组织TNF-α和Bax表达由模型组0.217±0.008,0.253±0.003降低为0.167±0.005,0.198±0.009(P<0.01),Bcl-2表达由模型组0.237±0.004增加为0.279±0.005(P<0.01);缬沙坦组TNF-α和Bax表达降低为0.183±0.009和0.233±0.004(P<0.05,P<0.01),Bcl-2增加为0.262±0.005(P<0.05) ;川芎嗪组Bax表达降低为0.217±0.005 (P<0.01),Bcl-2增加为0.272±0.010(P<0.01)。结论:1采用2-VO +硝普钠降压法成功地建立了缺血再灌注致脑损伤的VD大鼠模型。2缬沙坦和川芎嗪单独应用均具有一定改善VD大鼠学习记忆能力的作用;缬沙坦与川芎嗪联合用药较好地改善了VD模型大鼠的学习记忆能力。3缬沙坦与川芎嗪联合用药改善2-VO +硝普钠降压法制备的VD大鼠的学习记忆能力的途径有:①减轻缺血再灌注所致自由基形成增加及其所致钙超载和RAS系统激活所致自由基形成增加对VD大鼠海马神经元的损伤。②抑制中枢RAS激活,对抗RAS激活本身对大鼠海马神经元的损伤及其所致自由形成增加和炎性反应对大鼠海马神经元的损伤。③减轻缺血再灌注本身及其所致细胞内钙超载和RAS激活引起的炎症反应对VD大鼠海马神经元的损伤。④抑制缺血缺氧、大量氧自由基、钙超载激活-系列钙依赖性酶促反应、线粒体损伤等诱导引起的海马神经元细胞的调亡。