氟暴露小鼠精子线粒体DNA损伤的研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:healtw
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[目的]本试验通过研究氟化物对小鼠精子mtDNA及nDNA的影响,对其作用机制进行推测探讨,从而为进一步证明氟的生殖毒性奠定理论基础。[方法]3周龄雄性ICR小鼠100只,随机分成4组,每组25只,分别是对照组、低氟组、中氟组、高氟组,攻毒剂量为0 mg/L,25 mg/L、50 mg/L、100mg/L的NaF。氟暴露期间动态观察记录小鼠的饮水采食量及生长状况,60天后取样,分析精子常规。透射电镜(TEM)观察精子超微结构;流式细胞术(FCM)检测线粒体膜电势和nDNA完整性;同时提取精子总DNA,运用Real-time PCR技术测定小鼠精子mtDNA拷贝数;Long-PCR技术检测小鼠精子mtDNA完整性;PCR扩增小鼠精子线粒体基因MTCYB和MTATP6,产物测序筛查基因突变。[结果]1.与对照组相比,60天氟暴露组小鼠精子的密度、活率、活力均呈下降趋势,其中中氟组和高氟组精子密度出现差异显著(p<0.05),活率和活力差异极显著(p<0.01)。2.流式细胞术检测小鼠精子线粒体膜电势和nDNA完整性,结果发现,与对照组相比,高氟组小鼠精子线粒体膜电势显著降低(p<0.05),nDNA完整性也显著下降(p<0.05)。3.应用QRT-PCR技术检测小鼠精子线粒体基因16S rRNA和核基因GAPDH,计算mtDNA相对拷贝数。结果显示:与对照组相比,染氟组小鼠精子mtDNA拷贝数呈上升趋势,其中高氟组显著升高(p<0.05)。4.运用Long-PCR技术检测小鼠精子mtDNA完整性,结果未发现任何样本出现mtDNA片段缺失。5.利用透射电子显微镜观察试验小鼠精子的超微结构,结果显示高氟组小鼠精子头部核染色质发生浓缩现象,尾部中段横切面线粒体囊泡化或排列紊乱,主段和尾段外周致密纤维及9+2结构与对照组相比出现破坏缺失的几率增加。低氟组和中氟组未见明显变化。6.MTCYB和MTATP6基因PCR产物测序结果未发现基因突变位点。[结论]氟化物能够降低小鼠精子质量,诱导精子nDNA完整性下降和mtDNA拷贝数的增加,但并未发现mtDNA完整性的缺失和基因突变。其原因和机理仍然需要进一步研究证明。
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