蝎毒是存在于蝎尾腺内的一类具有多种生物活性的蛋白质或多肽混合物。不同的学者应用不同的方法证明了蝎毒的广泛的抗肿瘤活性，并且其在抗肿瘤的同时，具有明显的调节增强机体免疫力的作用，为一理想的抗肿瘤药物。但蝎毒成分复杂，直接应用毒副作用较大，且因其存在于蝎尾腺内，单从蝎尾腺采集蝎毒费时而量少，得到纯化的抗肿瘤有效成分更加困难且量少，价格昂贵，明显限制了其临床广泛推广应用，有必要采取一种经济、简便的途径获取其抗肿瘤有效成分。 目的： 在以往实验基础上，进一步分离纯化蝎毒抗肿瘤成分，应用基因工程的方法，构建含蝎毒抗肿瘤成分cDNA的工程菌，以期得到基因工程重组的蝎毒抗肿瘤成分，为其临床广泛推广应用奠定一定的基础。 方法： 1、应用HPLC方法，对蝎毒进行分离纯化，并应用凝胶电泳、蛋白芯片技术对其纯度进行检测。 2、应用肿瘤细胞H22和Lovo的体外抑制杀伤作用和动物移植瘤生长抑制作用实验，对分离纯化的蝎毒蛋白进行抗肿瘤活性检测。 3、对蝎毒具有抗肿瘤活性成分进行氨基酸序列测定，并结合网上已发表的蝎毒蛋白基因序列，设计、合成正反向引物，逆转录得到蝎毒抗肿瘤活性成分的cDNA，并利用基因工程技术构建筛选出含有蝎毒抗肿瘤活性成分DNA的工程菌，并对其进行诱导表达，得到重组的蝎毒抗肿瘤成分。 结果： 1、对不同产地、不同季节的蝎毒进行HPLC分离发现：所有蝎毒3500分子量以下组分中均有四个组分组成，但含量有明显差别。 2、经过对四个组分的肿瘤细胞体外抑制杀伤作用及动物移植瘤生长抑制作用实验的筛选发现蝎毒抗肿瘤有效成分主要存在于组分Ⅲ中。 3、对组分Ⅲ进行N、C端氨基酸进行测定，设计合成双向引物，逆转录得到一第二军医大学博士学位论文条大小约Z10bP特异扩增带，与预期目标相符，然后将其连接于T载体，转染E109大肠杆菌，进行进一步扩增筛选，提取质粒并测其序列，证实其为目的基因。然后将其与表达载体连接，转染E109大肠杆菌进行诱导表达，并进行分析，发现重组蛋白存在于大肠杆菌周间质内，得到可溶性融合重组蛋白。结论:1、蝎毒抗肿瘤有效成分主要存在于3500分子量以下组分m。2、构建的含有蝎毒抗肿瘤有效成cDNA的重组工程菌表达目的蛋白，为可溶性融合重组蛋白。