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目的:建立创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠模型,采用流式细胞术、免疫共沉淀等技术检测针刺对TBI大鼠小胶质细胞M1、M2型极化及TLR4/TRIF/My D88信号通路的影响,探讨针刺对颅脑损伤后小胶质细胞极化的作用及其机制。方法:实验一:将70只SPF级成年雄性SD大鼠随机分为正常组(10只)、模型组(30只)、针刺组(30只),模型组、针刺组根据治疗时间又分为1、3、5天3个亚组,每组各10只。模型组、针刺组参照Feeney’s自由落体硬膜外撞击法建立中度TBI大鼠模型,造模后12小时内针刺组开始治疗,选穴:百会(GV20)、风府(GV16)透哑门(GV15)、人中(GV26)、双侧合谷(LI4)。采用捻转泻法,每穴行针1min,隔5min行针1次,留针15min,治疗1次/日。模型组不治疗,但在相同时间固定15min。正常组不予任何处理。治疗结束4h后取材,切取损伤脑组织及周围皮层。采用m NSS法在取材前及造模后进行神经功能缺损评分;HE染色、尼氏染色观察损伤脑组织病理形态变化;流式细胞术检测损伤区1、3、5天小胶质细胞M1、M2型极化情况;免疫共沉淀技术检测1、3、5天小胶质细胞TLR4、TRIF、My D88总量及TLR4与TRIF、My D88结合的情况。实验二:将48只SPF级成年雄性SD大鼠按上法造模后随机分为阻断组、阻断加针刺组,每组24只;每组按治疗时间又分为1、3、5天三个时间亚组,每个亚组各8只。两组每天尾静脉注射1次TLR4抑制剂TAK-242,注射1h后阻断加针刺组如上法进行针刺治疗。采用流式细胞术检测1、3、5天小胶质细胞M1型极化情况。结果:m NSS神经功能缺损评分结果:造模前各组评分无差异。造模后第1天,模型组、针刺组评分均较正常组升高(P<0.01);模型组与针刺组之间无显著性差异(P>0.05)。模型组第3天评分升高、持续至第5天(P<0.05)。针刺组3~5天评分较模型组逐渐降低(P<0.05)。2.HE染色、尼氏染色病理观察结果:模型组1~3天损伤区及其周围脑组织形态结构疏松,间质水肿,炎性细胞浸润,细胞数量减少且排列杂乱,神经元肥大肿胀,甚呈空泡样,胞核偏移固缩、尼氏小体减少;损伤程度随时间延长进一步加重:与模型组比较,针刺组第3~5天细胞水肿及炎性细胞浸润逐渐减轻,大量胶质细胞和纤维填充病灶区,神经元排列相对致密规则,空泡样变性与核固缩减少,尼氏小体数量增加且较饱满。3.小胶质细胞M1、M2极化结果:CD11b/CD86标记M1极化的小胶质细胞、CD11b/CD206标记M2极化的小胶质细胞。(1)CD11b/CD86:与正常组比较,模型组从第1天开始上升,第3天达到高峰,并持续至第5天(P<0.01)。与模型组比较,针刺组第1天差异无显著性(P>0.05),第3~5天持续明显下降(P<0.01)。(2)CD11b/CD206:与正常组比较,模型组第1、3天无显著差异(P>0.05);第5天上升(P<0.01)。与模型组比较,针刺组第1天无显著差异(P>0.05);第3~5天持续明显上升(P<0.01)。4.TLR4/TRIF/My D88检测结果:4.1小胶质细胞TLR4、TRIF、My D88总量(Input TLR4、Input TRIF、Input My D88):(1)Input TLR4:与正常组比较,模型组第3~5天逐渐升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组第1天升高(P<0.01),第3~5天明显降低(P<0.01)。(2)Input TRIF、Input My D88:正常、模型、针刺三组间比较,第1~5天均无显著性差异(P>0.05)。4.2小胶质细胞TRIF、My D88与TLR4结合量(IP TRIF、IP My D88):与正常组比较,模型组IP TRIF、IP My D88第1~5天逐渐升高(P<0.01);针刺组第1~5天均较模型组降低(P<0.01)。5.TLR4阻断后小胶质细胞M1极化结果:阻断组与阻断加针刺组之间、两组内各时间点之间CD11b/CD86表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.针刺可减轻TBI大鼠脑组织病理损伤、改善一般情况,降低m NSS神经功能缺损评分,促进神经功能恢复。2.针刺可抑制TBI后持续升高的具有神经毒性的小胶质细胞M1型极化;加快促进具有神经保护作用的M2型极化,促使小胶质细胞极化由M1型优势向M2型优势转化。针刺对脑损伤后小胶质细胞M1、M2型极化具有双向良性调节(增益抑害)作用。3.针刺可下调TBI大鼠小胶质细胞TLR4总量、抑制TLR4与TRIF、My D88结合,对TLR4信号通路的两条胞内途径(TRIF、My D88)均有抑制作用。这可能是针刺调节脑损伤后小胶质细胞极化的重要机制。4.采用TAK-242阻断TLR4/TRIF/My D88通路后,小胶质细胞M1极化及针刺对该极化的作用均被抑制。这反证了针刺抑制TLR4/TRIF/My D88通路可能是针刺抑制小胶质细胞M1极化的主要作用途径。