土荆皮乙酸诱导膀胱癌5637细胞凋亡作用及其机制的研究

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目的研究二萜类化合物土荆皮乙酸(pseudolaric acid B)体外诱导人高危浅表型膀胱癌5637细胞增殖抑制和凋亡的作用,并且探讨其作用机制。旨在为膀胱癌的腔内灌注治疗拓展新的植物化学药物治疗提供实验资料。方法体外常规培养人膀胱癌5637细胞株,经终浓度为0、5、10、20、40、80μmol·L-1土荆皮乙酸分别处理24h、48h和72h后,用倒置显微镜下观察细胞数量、形态变化。MTT法测定5637细胞的生长抑制情况;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术观察20、40、80μmol·L-1土荆皮乙酸作用后5637细胞24、48h后的凋亡情况;免疫印迹法检测20、40、80μmol·L-1土荆皮乙酸作用后5637细胞24、48h后Survivin和Caspase-3蛋白表达的变化。结果土荆皮乙酸可明显抑制膀胱癌5637细胞的生长,并表现出明显形态学异常。MTT法检测结果提示5~80μmol·L-1土荆皮乙酸可以时间-剂量依赖方式抑制膀胱癌5637细胞增殖,并诱导5637细胞凋亡。光镜可见细胞变圆、体积变小、折光度减弱、伪足消失、包膜皱缩、胞质出现空泡,其与用药前相比有明显形态学改变。AnnexinV-FITC/PI双染结果发现土荆皮乙酸可以时间-剂量依赖方式诱导膀胱癌5637细胞凋亡。Western blot结果发现土荆皮乙酸可以时间-剂量依赖方式下调膀胱癌5637细胞Survivin的表达水平,同时对caspase-3表达有上调作用。结论土荆皮乙酸在体外可有效抑制膀胱癌5637细胞的增殖,诱导其发生凋亡,并且具有明显的剂量-时间依赖性。其机制可能与凋亡抑制蛋白Survivin的表达下调,效应蛋白Caspase-3的表达上调有关。
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