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本论文研究了UVB照射培养对酵母菌代谢、生理性能和活性成分的影响,确定了制备具有防晒、润肤和保湿功效的化妆品用活细胞衍生物(LYCD)的最佳生产工艺条件,并利用UVB照射培养技术,结合热冲击试验,成功地选育出一株耐高酒精度和耐高温的酵母菌株——UV-7-36-12-17。本文的主要研究结果如下: 1.在对酵母菌进行UVB照射培养过程中,摇床转速控制在70r/min时,不论采用297nm紫外灯还是312nm紫外灯,其培养液中的葡萄糖浓度4.0%降至0.05%的时间均为6h,需补加糖以满足酵母菌的正常生理活动。当用297nm灯照射时,培养液pH约经过12h就降低到3.0;而用312nm灯照射时,培养液pH的降低速率减慢,培养12h后pH仅降至3.6,但都需补加NaOH溶液调节培养液pH值至4.0以上。若采用pH5.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液配制培养基,则在84h培养周期内,培养液pH值始终维持在4.0以上,简化了操作,更利于刺激酵母菌形成抵御UVB辐射的活性物质。同时研究发现在进行UVB照射培养过程中,酵母菌利用葡萄糖生成酒精的能力下降。 2.酵母菌在UVB照射培养过程中,细胞形态和细胞质内含物也会发生变化。UVB照射会抑制酵母菌的生长繁殖。当接种量为1×106个/mL和1×107个/mL时,UVB照射培养的培养液中酵母细胞数明显低于对照,其最大值分别为0.85×108个/mL和1.08×108个/mL及1.07×108个/mL和1.46×108个/mL;当接种量为1×108个/mL时,照射培养与对照的生长情况相近,均于24h左右进入稳定期,其最大值分别为2.75×108个/mL和2.50×108个/mL,UVB照射培养的细胞数略高于对照;当接种量为1×109个/mL时,对照实验中酵母数在生长后期有较明显的下降趋势,而UV-B照射培养则没有出现明显的下降趋势,其最大值分别为17.90×108个/mL和19.30×108个/mL。 3.在添加0.05%酵母膏的培养基中接种2%活性干酵母进行UVB照射培养时,其酵母细胞的RNA含量可由Oh的8.94%增加到72h的9.88%,再延长培养时间,则RNA含量下降,与培养液OD260的变化趋势基本吻合;酵母细胞蛋白质含量变化不大,在41%左右,但培养液OD280值增加95.8%;酵母细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶〔CAT〕和过氧化物酶〔POD〕等酶活均呈下降趋势;而酵母细胞内海藻糖、麦角甾醇和葡聚糖含量均有不同程度的提高,其中海藻糖在UVB照射培养60h时达到最大值为113.9mg/g酵母;麦角甾醇含量在84h时达到最大值为15.43mg/g酵母;葡聚糖含量则一直增加,在培养到72h时其含量为22.60%。 4.酵母菌经UVB(297nm)照射培养72h时,其水解液紫外吸收能力达到最大。通过正交实验确定经UVB照射培养的酵母菌细胞最佳酶水解条件为: