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目的:枳葛口服液是全国名老中医孙同郊教授根据多年临床经验,总结出的纯中药解酒保肝制剂,本实验使用枳葛口服液干预酒精性肝病大鼠模型,从腺苷酸活化蛋白激酶/固醇调节元件结合蛋白-1/脂素-1(AMPK/SREBP-1/Lipin-1)通路探索枳葛口服液对酒精性肝病大鼠糖脂代谢的影响机制。方法:1、实验分组和构建酒精性肝病模型:雄性清洁SD大鼠72只,体重200~230g,先适应性喂养1周,然后随机分为6个组:正常组、酒精性肝病模型组(模型组)、枳葛口服液高、中、低剂量组(以下简称高剂量组、中剂量组和低剂量组)以及解酒灵口服液对照组(对照组),每组各12只。正常组大鼠每天灌胃蒸馏水1.0mL/100g,其余各组大鼠按照同等剂量(1.0mL/100g/d)给予泸州老白干(酒精度为52%)灌胃,酒精灌胃后高、中、低剂量组分别给予1.0mL/100g/d、0.5mL/100g/d和0.25mL/100g/d的枳葛口服液灌胃,而对照组则按照0.5mL/100g/d灌胃解酒灵口服液,连续造模及给药12周。2、取材:各组大鼠根据体重给予10%的水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射麻醉,麻醉满意后腹主动脉取血离心,保存于-80℃冰箱中;取肝脏剪切成两份,然后分别予10%福尔马林和4%甲醛溶液固定。3、指标检测:酶标仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)等指标含量,ELISA检测胰岛素浓度(INS);根据HOMA-IR模式[IR=(FBG*INS)/22.5]计算胰岛素抵抗(IR),HOMA-IS模式[IS=1/(FBG*INS)]计算胰岛素敏感性(IS);HE染色和油红O染色检测肝细胞损伤程度和脂肪含量;免疫荧光及免疫组化检测AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路相关蛋白表达水平。结果:肝功能指标(ALT、AST)比较:与正常组相比,模型组大鼠ALT、AST水平升高(P<0.01),各治疗组大鼠ALT、AST均有下降,以高剂量组下降最显著(P<0.01),与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05);中剂量组与对照组相似。各组大鼠脂代谢相关指标(TC、TG、HE染色、油红O染色)比较:与正常组相比,模型组大鼠TC、TG均有升高(P<0.01),其余治疗组大鼠血脂水平与模型组相比均有下降,其中仍以高剂量组下降最明显(P<0.01),其次为中剂量组和对照组;肝组织HE染色示:正常组:肝细胞大小均匀,界限清楚,形态正常,其内未见脂肪空泡;模型组:肝组织结构紊乱,边界不清,细胞核偏移明显,分布不均,整个肝组织可见大量脂肪空泡,部分小空泡融合成大脂肪空泡;高剂量组:细胞结构清晰,和正常组较接近;中剂量组表现与对照组大致一样:脂肪空泡较高剂量组有增加,但较模型组少;低剂量组与模型组比较变化不大;油红O染色示:正常组:肝细胞大小正常,核染色呈蓝色,细胞与细胞间排列规整、有序,细胞内无红色脂滴沉积;模型组:肝细胞肿胀明显,周围可见大片红色脂滴聚集成簇;与模型组相比:枳葛口服液高、中剂量组及对照组肝细胞红色脂滴均有减少,其中高剂量组减少最明显;中剂量组和对照组肝细胞内红色脂滴数相近,低剂量组红色脂肪颗粒沉积虽明显,但较模型组仍有减少。各组大鼠糖代谢指标(FBG、INS、IS、IR)比较:与正常组相比,模型组大鼠FBG、INS含量升高(P<0.01),肝脏对胰岛素的敏感性(IS)降低(P<0.01),胰岛素抵抗(IR)显著(P<0.01),与模型组比较,其余各组大鼠血清FBG及INS均有不同程度的下降,其中高剂量组胰岛素敏感性增加(P<0.05)、胰岛素抵抗改善(P<0.01),几乎接近正常组,总体而言,各治疗组指标改善程度依次为高剂量组>中剂量组=对照组>低剂量组。肝组织AMPK/SREBP-1/Lipin-1糖脂代谢相关蛋白表达水平比较:与正常组相比,模型组AMPK表达显著抑制,其下游脂质蛋白SREBP-1、Lipin-1、FASN表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组中肝脏AMPK蛋白被激活,其下游各脂质蛋白表达受抑制,以高剂量组差异最明显(P<0.01),其次是中剂量组和对照组(P<0.05),低剂量组改善不大(P>0.05);对免疫组化进行光密度分析,可得出相同的结果。结论:1、枳葛口服液可以减轻酒精性肝病大鼠肝损伤,降低血脂水平,减少肝脏脂质沉积和脂肪空泡,并且可以降低酒精性肝病大鼠血糖及血胰岛素浓度,增加肝脏的胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗,从而调节糖脂代谢平衡;2、其作用机制可能与AMPK/SREBP-1/Lipin-1糖脂代谢通路相关,枳葛口服液可通过激活AMPK的表达,下调其下游脂质蛋白FASN、SREBP-1、Lipin-1的合成,改善机体高血脂、高血糖、高胰岛素浓度状态,进而改善酒精性肝病大鼠糖脂代谢异常,防治酒精性肝病发生发展。