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趋化因子及其受体是肿瘤细胞生物学行为的重要调节因素。趋化因子和受体的结合激活细胞内G蛋白和磷脂酶C,通过刺激肿瘤细胞生长、趋化肿瘤细胞的定向迁移、增加肿瘤细胞的抗逆性和与胞外基质的黏附性等直接或间接作用促进肿瘤的生长和转移。
人趋化因子受体CXCR4在肿瘤细胞中广泛表达,基质细胞衍生因子SDF-1是其特异性配体。SDF-1与CXCR4的相互作用与多种肿瘤的黏附、扩散、转移、入侵行为密切相关。制备CXCR4抗体对研究CXCR4的生物学功能和肿瘤治疗有重要意义。为了原核表达CXCR4并制备其抗体,将构建的pGEX-4T1-CXCR4重组质粒转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),诱导表达后发现,CXCR4全蛋白对大肠杆菌细胞有毒性作用,无法进行原核表达,但CXCR4主要配体结合部位N端肽段(1-42aa)在同一原核表达系统中能够高效可溶性表达。分别用亲和层析法和硫酸铵沉淀法对重组CXCR4N端肽段进行纯化,得到纯度为80%的重组CXCR4N端肽段,为下一步筛选CXCR4特异性抗体奠定了基础。
恶性肿瘤的无限制侵袭性生长和转移依赖于血管生成(angiogenesis),许多研究表明,抑制血管生成能有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。因此,抗血管生成有望成为一种新型的肿瘤疗法。
arresten是新发现的一种强有效的血管生成抑制因子,是Ⅳ型胶原蛋白a1链的羧基末端非胶原区-1多肽片段,研究发现arresten能有效抑制新生血管形成及肿瘤的生长和转移。为进一步研究arresten的生物学功能,在E.coliBL21(DE3)中原核表达重组arresten。结果显示重组arresten大部分形成包涵体。将纯化后的可溶性重组arresten作用于鸡胚绒毛尿囊膜,发现可溶性重组arresten蛋白纯化液有一定的血管生长抑制作用。