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第一章声诺维联合超声辐照HXO-44Rb细胞的安全条件 目的：探索超声造影剂声诺维(SonoVue)联合超声辐照HXO-44Rb细胞的安全条件。 方法：将培养好的HXO-44Rb细胞以1×105个/孔接种到24孔细胞培养板上，设置4组：第1组：空白对照组（HXO-44Rb细胞）；第2组：细胞+声诺维（造影剂浓度10％、20%）；第3组：细胞+超声辐照（辐照方案：辐照时间40 s、60 s、80 s，辐照声强0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2、2.0 w/cm2）；第4组：细胞+超声辐照+声诺维组（辐照方案：辐照时间40 s、60 s、80 s，辐照声强0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2、2.0 w/cm2，造影剂浓度10%、20%）。以上各组每组设置3个复孔。分别于辐照2h、24h、48 h后光镜下观察细胞的形态及生长情况，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测细胞存活情况。 结果：在辐照时间为40 s、60 s、80 s，辐照声强为0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2，造影剂浓度为10%、20%的情况下，在各个时间点观察时，肿瘤细胞的外形维持球形，均未发生明显改变，仍呈片状、团状聚集生长，MTT法检测细胞存活率最低（98.40±0.21）%，各组间差异无显著性(P>0.05)；辐照时间为40 s、60 s、80 s，辐照声强为2.0 w/cm2，造影剂浓度为10%、20%的情况下，肿瘤细胞外形肿胀，培养基中可见细胞碎片，细胞间隙较其他组分散，MTT法检测到细胞的存活率为（89.12±0.97）%，较其它组明显降低(P<0.05)。 结论：HXO-44Rb细胞在辐照时间为40 s、60 s、80 s，辐照声强为0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2，造影剂浓度为10%、20%条件下，各组细胞活性无明显抑制；辐照时间为40 s、60 s、80 s，辐照声强为2.0 w/cm2，造影剂浓度为10%、20%的情况下，MTT法检测细胞的存活率为（89.12±0.97）%，较其它组明显降低。 第二章 UTMD介导载hsv1-tk-gfp质粒转染HXO-44Rb细胞实验条件的优化及结果评价 目的：探讨超声造影剂声诺维(SonoVue)联合超声辐照介导载hsv1-tk-gfp质粒转染HXO-44Rb细胞的可行性；对比不同辐照条件及造影剂浓度下介导hsv1-tk-gfp质粒转染HXO-44Rb肿瘤细胞效率的差异，探索最佳转染条件。 方法：将培养好的HXO-44Rb细胞以1×105个/孔接种到24孔细胞培养板上，设置5组：第1组：空白对照组（HXO-44Rb细胞）；第2组：细胞+质粒；第3组：细胞+质粒+超声辐照（辐照时间：40 s、60 s、80 s，辐照声强：0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2）；第4组：细胞+质粒+声诺维（造影剂浓度：10%、20%）；第5组：细胞+质粒+超声辐照+声诺维（辐照时间：40 s、60 s、80 s，辐照声强：0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2，造影剂浓度：10%、20%）。每组共3个复孔，质粒用量均为1μl/孔。转染24h,48h后于倒置荧光镜下观察绿色荧光分布情况；转染48 h后用流式细胞仪检测各组hsv1-tk-gfp质粒转染率，MTT检测细胞存活情况。 结果：各组中：第4组中条件：辐照声强为0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5w/cm2对应的转染率分别为（3.82±1.03）%、（6.53±1.07）%,辐照条件为辐照时间60 s、辐照声强1.5 w/cm2、造影剂浓度为20%下质粒的转染率最高（14.07±0.21）%，明显高于其它各组，差异具有显著性（P<0.05）；MTT法检测各组间细胞存活率在（98.40±0.21）%～（98.47±0.27）%之间，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论：辐照时间为60 s、辐照声强为1.5 w/cm2、造影剂浓度为20%的条件下hsv1-tk-gfp质粒转染率最高。 第三章 hsv1-tk/GCV自杀基因系统对HXO-44Rb细胞杀伤作用及效果评价 目的：检测声造影剂声诺维(SonoVue)联合超声辐照介导载hsv1-tk-gfp质粒转染HXO-44Rb细胞后hsv1-tk/GCV自杀基因系统诱导HXO-44Rb肿瘤细胞凋亡的能力。 方法：将培养好的HXO-44Rb细胞以1×105个/孔接种到24孔细胞培养板上，设置3组：第1组：空白对照组（HXO-44Rb）；第2组：细胞+昔洛韦（昔洛韦浓度：1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、1 mg/ml）；第3组：细胞+质粒+超声辐照+声诺维+昔洛韦（辐照时间：40 s、60 s、80 s，辐照声强：0.5 w/cm2、1.0 w/cm2、1.5 w/cm2，造影剂浓度：10%、20%；昔洛韦浓度：1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、1 mg/ml）。细胞数量均为1×105个/孔，质粒用量均为1μl/孔。转染48h后倒置荧光镜下观察细胞存活情况，转染48 h后MTT法检测细胞的存活率。 结果：各组加入昔洛韦浓度为1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml时，细胞的存活率未见明显降低；加入1 mg/ml的昔洛韦后，辐照声强为0.5 w/cm2、1.0 w/cm2，HXO-44Rb细胞的存活率分别为（95.29±0.94）%、（92.58±1.29）%；在1.5 w/cm2、60 s、20%的条件下（55.26±1.21）%，较前两组条件明显减低，差异具有显著性（P<0.001）。 结论：HXO-44Rb细胞中hsv1-tk-gfp质粒转染率达到(14.07±0.27)%，前体药物GCV单次给药浓度达到1 mg/ml时可导致HXO-44Rb细胞大量死亡。