太空诱变西瓜突变体检测及相关片段的克隆

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:hellstone
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西瓜(Citrullus lanatus)原产于非洲热带草原,是一种世界性园艺作物。因其具有较高的食用价值和医疗保健价值被广泛种植,是我国的优势产业。由于西瓜遗传资源非常狭窄,在培育新品种方面受到很大限制。空间诱变育种是航天技术与生物技术、农业育种技术相结合的综合性的新兴育种技术,在植物诱变育种中的应用前景十分广阔。本研究对太空诱变西瓜京欣一号父本的M2代200个单株以组织培养技术进行保存和形态学观察,利用AFLP分子标记技术进行了突变体分子检测,并对检测到的突变植株的差异片段进行克隆、测序和分析,主要研究结果如下:1.西瓜茎尖消毒的最佳方案是先用流水冲洗30 min,75%酒精消毒10~15s,用0.1%HgCl2处理10 min,无菌水冲洗4~5次,植于培养基上。茎尖伸长最佳培养基为:MS+0.2 mg/L KT。2.对西瓜无菌茎尖进行形态学观察,发现No.135比对照生长缓慢,初步推断为突变植株。3.利用53对AFLP引物对200个太空诱变的M2代单株进行突变体检测,引物E50/M60在No.74和No.135两个单株上检测到差异条带,从分子水平上验证了No.135单株为突变体,同时还发现了No.74突变株。4.对突变植株No.74、No.135的差异片段分别进行回收,克隆和测序,No.135的片段大小为253 bp;No.74单株的两个特异片段大小分别为81 bp和98 bp。5.利用TAIL-PCR技术对No.135单株的差异片段进行延伸,得到长度为1379 bp的片段,在GenBank上用BLASTn和BLASTx软件对其进行序列同源性比对,该片段与黄瓜光照诱导下的EST序列有93%的同源性。
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