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本研究用Tizol试剂直接从尿囊液中抽提病毒核酸，参考已报道的IBV－ Beaudette核衣壳基因，自行设计—对引物，以IBV—N毒株（肾型）、ZJ971 毒株（腺胃型）和一个参考疫苗毒株H52为模板，用RT－PCR扩增它们的核衣 壳基因，将扩增得到的cDNA克隆入pBluescript SK载体中。用Lasefgene analysiS软件分析它们的核苷酸和推导的氨基酸序列。在此基础上，把ZJ971 毒株核衣壳基因克隆到pBV220表达载体，利用大肠杆菌进行原核表达，并 用Western－blotting检测。结果显示： ZJ971毒株、N毒株、H52毒株的核衣壳基因ORF全长都为1230个核苷 酸，均编码一条409个氨基酸组成的多肽。 腺胃病变型IBV－ZJ971毒株与其他各血清型IBV的核昔酸同源性在 87．0％—98．6％之间，氨基酸同源性在91．0％一98．1％之间。171位氨基酸突 变导致这一区域的亲水性大为增强，但283位氨基酸突变导致邻近的282位 亲水性下降，使其最大疏水峰由 197位移到282位。系统进化分析表明 ZJ971 毒株与DI 466、Cu／TZ毒株的亲缘关系较近，它们可能有共同的祖先。 肾病变型IBV-N毒株与其他各血清型IBV的核苷酸同源性均不高（86．6％ —87．4％），氨基酸同源性在90．5－91．7％之间。其中189-190、223、236、286、 334-336位氨基酸的突变使上述5个区域的亲水性明显下降，240、301位氨 基酸的突变使这两个区域的亲水性稍有上升，整个蛋白的平均亲水值比其 它IBV小。系统进化分析表明N毒株与其它毒株（包括肾病变型Gray）的亲 缘关系均较远，处于相对独立的一支。 综合上述结果进一步从核衣壳蛋白基因角度证实 ZJ971 毒株、N毒株 是不同于其它各型IBV的新的变异株。 Western-blotting 只在重组表达菌样品中检测出一条约45kD的特异性蛋 白条带，与预期的蛋白分子量大小一致，表明 IBV－ZJ97毒株的核衣壳蛋 白确实在大肠杆菌中获得了高效表达，表达的核衣壳蛋白具有一定的金免疫 反应性，为进一步研究和开发IBV基因工程苗奠定基础。