CsPID调控黄瓜叶片形态建成以及胚珠发育的机制研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:lk656lk55lk6
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黄瓜(Cucumis sativus L.2n=2x=14)作为世界十大蔬菜之一,在我国的蔬菜市场中占据重要位置,有较大的经济价值。黄瓜叶片为掌状、在叶腋处具有卷须,并且具有雌雄同株、单性花以及单性结实等特性。以黄瓜为研究对象有助于了解以上性状形态建成过程中的分子和生理机制,为相关性状的研究提供可靠的研究基础。本研究中,为了进一步研究黄瓜器官形态建成的分子机制,通过对前期黄瓜EMS突变体库的筛选获得了稳定遗传的黄瓜圆叶突变体(rl),对其进行了表型鉴定、遗传分析、基因定位以及分子机制研究,主要的研究结果如下:1)rl突变体表型与野生型相比主要变化包括:叶片由掌状变为圆形,卷须数量明显减少,胚珠起始发生缺陷,雄花花蕊异常,导致rl突变体雌性器官完全不育以及雄性器官的部分不育性。2)利用MutMap~+技术进行全基因组重测序并将候选基因定位于1号染色体,将其中符合筛选标准的22个SNPs进行基因分型检测,初步确定候选基因为Csa1G537400(CsPID),等位性检测结果进一步证明CsPID为调控黄瓜叶片和花器官形态的建成的基因。构建35S::CsPID过表达载体转入拟南芥pid-14突变体的杂合子中,获得转基因株系,转基因株系表型与pid-14突变体相比恢复了部分育性,花器官形态也基本上与野生型一致,说明CsPID的功能在拟南芥中具有保守性,参与花器官的发育,同时也确定了CsPID为调控黄瓜rl突变体的目标基因。3)原位杂交结果表明CsPID主要在叶片、顶端分生组织两侧、花瓣、萼片以及子房的胚珠原基中有表达,另外qRT-PCR的结果也表明CsPID在叶片和子房中表达量较高。IAA定位的结果表明IAA主要在野生型子房的胎座以及胚珠原基中富集,而在rl突变体中的相同部位并没有产生富集,该结果也与CsPID在子房中的表达模式一致。4)亚细胞定位结果证明了CsPID定位于细胞膜和核膜上,而Cspid定位情况则发生了变化,在细胞膜上呈点状分布,从而推测rl可能通过改变亚细胞定位的模式从而破坏了CsPID的功能。5)通过对野生型和rl突变体子房进行转录组测序以及差异表达基因分类,筛选出与生长素极性运输和子房发育相关的基因,CsPID可能通过调控这些基因的表达从而影响了黄瓜侧生器官和胚珠的发育过程。6)酵母双杂交结果表明CsPID可以与极性基因CsREV在蛋白水平上发生互作,BiFC的结果也进一步证明CsPID和CsREV共定位于细胞膜和核膜上。
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