聚(γ-苄基-L-谷氨酸)改性纳米羟基磷灰石/聚乳酸骨组织工程支架制备及生物性能研究

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人骨是一种结缔组织,主要是由生物磷灰石和骨胶原纤维构成。其中羟基磷灰石(HA)是人体硬组织,如骨骼和牙齿的主要无机成分,它为硬组织提供很好的刚性;骨胶原纤维是一种天然高分子,它赋予骨良好的柔韧性和优异的生物活性。从材料学角度而言,大自然把有机物与无机物互相巧妙而紧密地结合起来形成骨,满足了骨的生物学和力学要求。多年来,人们一直试图通过将无机非金属材料和有机高分子材料复合,制备多级结构纳米材料来模仿天然骨。人工合成的HA成分和结构与骨相似,具有优良的生物相容性和骨传导,广泛应用于骨科。左旋聚乳酸(PLLA)作为一种性能优异的可降解高分子材料,已被美国食品药品管理局(FDA)许可应用于临床,在药物控释和组织修复方面具有广阔的应用前景。将纳米HA(n-HA)与可降解的PLLA复合可以将HA的成骨性能与PLLA的生物相容性结合,获得性能优异的复合材料。但还存在诸如HA纳米颗粒分散性不好,HA与PLLA界面相容性差,易相分离,植入体内后骨结合能力不理想等问题,已经成为制约其最终应用的一个关键因素。n-HA/PLLA复合材料的制备方法还有很大的研究空间,通过对实验数据进行可靠的统计分析,有助于研制具有更好的力学性能、生物相容性和成骨性的复合材料。本文从HA纳米粒子表面改性出发,设计并制备了改性n-HA/PLLA组织工程支架,并通过体内、体外实验对材料的性能进行了研究,主要内容如下:采用表面接枝聚(γ-苄基-L-谷氨酸)(PBLG)的改性n-HA(PBLG-g-HA)与PLLA复合,获得新型HA-g-PBLG/PLLA纳米复合材料。通过对HA表面化学改性,有效改善了n-HA在氯仿溶液中的均匀分散性,实现了HA表面从亲水性到疏水性的转变,进而可以增强HA与PLLA基体的相互作用。采用相分离技术制备了具有三维多孔结构的组织工程支架,其孔隙率在85%以上,孔径在30~200μm,具有大孔小孔共存的多级结构。通过观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)形态及其细胞增殖状况,对成骨细胞在支架表面的粘附、生长和增殖的情况进行探究;通过实时定量荧光PCR(RT-PCR)实验技术检测成骨相关基因的表达;通过对鼠颅骨和股骨缺损进行体内修复实验,考察材料的骨修复效果及其临床应用潜能。研究结果表明,PBLG-g-HA/PLLA复合材料由于加入了n-HA,其细胞粘附、生长、增殖和以及I型胶原(COL-I)等成骨相关基因的表达明显上调;三维支架材料的生物学性能和动物骨骼修复效果明显优于HA/PLLA复合材料和PLLA高分子材料;体外实验显示当PBLG-g-HA在复合材料中比重为10%时,体外诱导BMSCs成骨向分化的能力最强;体内实验μ-CT、H&E染色和I型胶原蛋白(Col-I)免疫组化结果显示,PBLG-g-HA/PLLA组织工程支架的骨生成性能明显增高;利用TRAP染色评价不同支架对于破骨细胞数及染色浓度的影响,观察到处理组间染色浓度和破骨细胞数没有显著差别,而空白对照组表面的破骨细胞数量更多。与文献相比,在HA表面改性方面的文献多数集中于改善其浸润性,而对改性HA的生物性能却较少关注。本文的主要创新在于:材料结构设计方面在充分考虑到界面物理性能的同时,又兼顾了材料的生物性能的提高,同时实现了物理性能和生物性能的改善;此外,本文所采用的改性方法在室温即可完成,同时适用于多种氨基酸单体的聚合及材料表面改性的处理,具有很好的普适性。另外,本文深入研究了PBLG-g-HA/PLLA纳米复合材料的生物相容性、成骨活性,为新材料的制备和临床应用提供了实验依据,同时证明PBLG-g-HA/PLLA支架具有良好的成骨性,有望作为一种新的骨组织修复材料在临床中取得应用。
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