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流感（Influenza,流行性感冒）是由正黏病毒科流感病毒属（Influenza virus,IV）引起的一种急性、热性呼吸道传染病。根据病毒粒子核蛋白（Nucleocapsid protein,NP）和基质蛋白（Matrix protein,MP）的基因和抗原特性不同,可将流感病毒属分成A、B、C、D四个型,其中以A型流感病毒最为常见。由于猪呼吸道内同时含有α-2,3和α-2,6半乳糖苷唾液酸受体,所以猪被认为是A型流感病毒的天然“混合器”。禽、猪、人流感病毒可在猪体内发生重组产生新型病毒,并有可能传播到人群中引起大流行,给公共卫生造成严重威胁。血凝素（Hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）是A型流感病毒粒子表面的抗原蛋白,根据HA和NA蛋白的不同又可将A型流感病毒划分成不同亚型。目前,H1N1亚型流感病毒是人群和猪群中流行的主要流感病毒亚型之一,历史上4次人类流感大流行中,其中有两次都是由H1N1亚型流感病毒引起的,包括1918年西班牙流感和2009年新型甲型H1N1流感（pdm09 H1N1）。广东省是我国人口密集的大省,进出口贸易发达,是流感病毒的独特生态圈,因此对流行于广东省人群和猪群中的H1N1亚型流感病毒进行生物学特性研究,对于该地区人群及猪群的生物学安全具有重要意义。猪流感病毒反复在鸡胚或非猪本体细胞上繁殖会使得原始病毒的相关特性改变,为此,筛选猪本体细胞用于SIV的繁殖对维持原始毒株的特性具有重要意义。本研究选取广东地区H1N1亚型猪流感病毒和人流感病毒作为研究对象,通过对病毒进行基因特征、遗传演化、体外生长能力以及致病性特点进行分析,对于广东省A型H1N1亚型流感病毒的防控监测、病毒的分离及原始毒株的保护以及公共卫生学安全具有重要意义。本研究于2017年在广东地区共采集猪鼻拭子样品319份,通过进行流感病毒M基因检测,筛选出阳性样品5份,阳性率为1.58%。5份阳性拭子感染MDCK细胞后共分离到4株猪流感病毒,病毒总分离率为1.25%。经鉴定4株猪流感病毒属于H1N1亚型,33株H1N1亚型人流感病毒由广州市疾病预防控制中心惠赠。对37株流感病毒进行遗传演化分析,结果显示:4株猪流感病毒隶属于同1个基因型,HA、NA、M基因均属于欧亚类禽分支（EA H1N1）,内部基因PB2、PB1、PA、NP基因属于pdm09 H1N1分支,NS基因属于经典型分支（CS H1N1）。33株人流感病毒隶属于同1个基因型,8个基因片段全部属于pdm09 H1N1分支。对HA蛋白上受体结合位点进行分析发现,4株猪流感病毒显示出对哺乳动物的适应性,部分人流感病毒受体结合位点处发生氨基酸突变;对抗原位点进行分析发现,4株猪流感病毒抗原位点处未发生氨基酸突变,部分人流感病毒抗原位点处发生了氨基酸突变;其余蛋白上未发现关键致病性位点处氨基酸发生突变。对3株流感病毒代表株在6种不同细胞上进行体外复制能力的测定,结果显示:猪流感代表毒株和人流感代表毒株在MDCK细胞上生长滴度范围分别为2.50～8.50lg TCID50/m L和3.30～7.67 lg TCID50/m L;猪流感代表毒株和人流感代表毒株在PK15细胞上生长滴度范围分别为3.33～6.33 lg TCID50/m L和1.67～3.90 lg TCID50/m L;猪流感代表毒株和人流感代表毒株在ST细胞上生长滴度范围分别为4.50～6.50lg TCID50/m L和0～3.33 lg TCID50/m L;猪流感代表毒株和人流感代表毒株在3D4/21细胞上生长滴度范围为3.50～6.50 lg TCID50/m L和1.50～6.50 lg TCID50/m L;猪流感代表毒株和人流感代表毒株在PED细胞上生长滴度范围分别为1.67～6.83 lg TCID50/m L和2.67～5.50 lg TCID50/m L;猪流感代表毒株和人流感代表毒株在IPEC-1细胞上生长滴度范围分别为0.67～2.67 lg TCID50/m L和0～1.50 lg TCID50/m L。对猪流感代表株S182、人流感代表株H752分别进行猪体内感染实验,结果显示:S182感染猪后可引起临床症状;感染组和同居组鼻洗液病毒滴度范围分别为1.70～2.37 lg TCID50/m L和1.37～3.37 lg TCID50/m L;感染组和同居组脏器病毒滴度分别为1.37～2.37 lg TCID50/g/m L和1.37～2.20 lg TCID50/g/m L;感染组和同居组抗体滴度范围分别为1:10～1:20和1:10～1:160。H752感染猪后未引起明显临床症状;感染组和同居组鼻洗液病毒滴度范围分别为1.20～2.37 lg TCID50/m L和1.20～2.20 lg TCID50/m L;感染组和同居组脏器病毒滴度分别为1.37～2.20 lg TCID50/g/m L和1.37～2.20lg TCID50/g/m L;感染组和同居组抗体滴度范围分别为1:10～1:20和1:10～1:20。综上所述,流行于广东省的H1N1亚型猪流感病毒内部已经与其他分支基因发生了重组;虽然H1N1亚型人流感病毒未发生基因重组,但其HA基因上抗原位点、受体结合位点以及内部基因上与致病性相关位点处氨基酸已经发生突变。两组病毒在MDCK、3D4/21和PED细胞上上生长能力相近且滴度较高,因此,后2种细胞可作为分离流感病毒的候选细胞系;PK15、ST和IPEC-1 3种细胞上猪流感病毒比人流感毒株生长能力强。两组病毒都能成功感染猪并引起传播,致病性未发现明显区别。本研究结果将为广东省H1N1亚型流感病毒的监测防控、公共卫生学安全、适用于分离流感病毒猪本体细胞的遴选以及近年主要流行H1N1流感病毒对猪的致病能力研究提供理论依据和数据支持。