【摘 要】
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6-氨基青霉烷酸(6-APA)是生产各种半合成青霉素的原料,在半合成抗生素工业中占据着重要地位。固定化青霉素酰化酶能水解青霉素产生6-APA,这一催化过程已在医药工业中广泛应用
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6-氨基青霉烷酸(6-APA)是生产各种半合成青霉素的原料,在半合成抗生素工业中占据着重要地位。固定化青霉素酰化酶能水解青霉素产生6-APA,这一催化过程已在医药工业中广泛应用。粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)以其对底物高亲和力、对热、pH及有机溶剂稳定性好的酶学特点在工业应用上显示了良好的前景。本文研究了AfPGA在商品化环氧载体Eupergit CM上的固定化及后修饰,优化固定化条件为1M,pH8.0的磷酸钾缓冲体系,30℃下150rpm固定化36-48小时,投酶量约为500-550 U/g(湿重)载体,得到的固定化酶表观酶活为177 U/g wet carrier,收率为41%。固定化酶经巯基乙醇修饰后提高了操作稳定性及热稳定性。固定化AfPGA的最适pH值为9.0,最适温度为47℃,在pH4-9的范围内很稳定,存放16小时后酶活保留均在90%以上；固定化酶在40℃以下稳定,保温4小时活力保留在96%以上。固定化酶的各项性能均优于游离酶。用固定化AfPGA催化水解PGK,投入底物浓度为4%,6-APA产率为60.5%。比较Eupergit CM与胺基载体ZH-HA固定化AfPGA的效果, ZH-HA固定化酶活性稍好于Eupergit CM,其最适pH值为8.0,相较Eupergit CM固定化酶更偏中性,酶的实际应用效果更好；两种固定化酶的最适温度均为47℃,高温范围内Eupergit CM固定化酶活力优于ZH-HA;两种固定化酶均在pH4-9的范围内稳定,Eupergit CM固定化酶的热稳定性优于ZH-HA.
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