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目的:脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞建立炎症模型,探索山楂酸(Maslinic acid,MA)对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用及其机制。方法:1.LPS剂量筛选:将状态良好的RAW264.7细胞1×10~5/孔接种于96孔细胞培养板中,培养至对数生长期,不同浓度LPS(0、50、100、500、1000、1500、2000、5000ng/mL)作用24h,测各组细胞活力;细胞接种于24孔细胞培养板中,培养过夜,加入不同浓度LPS(0、500、1000、1500、2000、4000ng/mL)作用24h,测各组NO含量。2.MA剂量及作用时间筛选:培养RAW264.7细胞,按1×10~5/孔接种于96孔细胞培养板中,培养12h,加入不同浓度MA(0、2.5、5、10、15、20、25、30、35、50μmol/L),MTT法检测各组细胞活力;LPS(1000ng/mL)诱导RAW264.7细胞构建炎症模型,设对照组、LPS组(模型组)、LPS+MA(5、10、15、20、25、30μmol/L)组,测各组NO含量;为探索MA作用时间,设对照组、LPS组(模型组)、LPS+MA(15μmol/L MA预作用2、1、0h)组,测各组NO含量。3.探索MA对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用及其机制研究:试验分为对照组、模型组、LPS+MA(5、10、15、20μmol/L)组,显微镜下(40倍)对细胞进行形态学检测,RT-PCR技术检测各组细胞内IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2、STAT3的mRNA水平,Western Blot技术检测STAT3蛋白磷酸化水平;试验分组为对照组、模型组、MA(20μmol/L)单独作用组、LPS+MA(10、15、20μmol/L)组,Western Blot技术检测iNOS、COX-2表达水平以及JAK1蛋白磷酸化水平。结果:1.LPS刺激细胞,与对照组相比,1000ng/mL的LPS作用24h,细胞活力无显著影响,NO含量显著升高。2.不同浓度的MA作用细胞后,与对照组相比,MA在35-50μmol/L时细胞活力显著降低,判定MA安全浓度为0-35μmol/L;1000ng/mL的LPS作用细胞,不同浓度MA进行干预,10-20μmol/L的MA剂量依赖性抑制LPS引起的NO升高;MA(15μmol/L)进行不同作用时间干预,预作用2h对NO含量有较显著的抑制作用;细胞形态学检测发现,对照组形态规则,模型组形态各异,加入MA后,细胞形态逐渐恢复;RT-PCR技术检测MA对炎症反应中IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2、STAT3在mRNA水平表达的影响,MA保护组表达量显著低于模型组;Western Blot检测对iNOS、COX-2蛋白表达以及JAK1、STAT3蛋白磷酸化水平的影响,MA保护组表达量显著低于模型组。结论:1.在LPS诱导的RAW264.7细胞炎性反应中,MA可通过降低RAW264.7细胞内NO含量和IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2在mRNA水平以及iNOS、COX-2蛋白水平的表达进而起到保护作用。2.在LPS诱导的RAW264.7细胞炎性反应中,MA能有效降低STAT3 mRNA水平以及抑制JAK1、STAT3磷酸化水平,因此,MA可通过STAT3信号通路对RAW264.7细胞起到抗炎保护作用。本研究可为MA抗炎机制的研究提供一定的理论基础。