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目的:分析视网膜母细胞瘤细胞Y-79、视网膜色素上皮细胞ARPE-19中叶酸受体的表达差异，探讨其与病理特征的关系，为进一步研究靶向视网膜母细胞瘤药物载体奠定基础。壳聚糖是一种优良的医用生物材料，可与靶向药物或含双官能团的醛化学偶联，制成前体药物制剂，以改善药物的药代动力学性质，增强药效。本课题制备叶酸偶联壳聚糖纳米粒，以实现局部给药，药物缓释，同时改善抗肿瘤药物在眼内的生物利用度，为视网膜母细胞瘤的治疗拓展了新途径。 方法:实验首先进行叶酸受体表达的检测，采用Trizol法提取Y-79细胞、APRE-19细胞中总RNA，应用实时荧光定量PCR方法检测两样品中叶酸受体的mRNA表达情况;运用Western blot方法检测叶酸受体在视网膜母细胞瘤、视网膜色素上皮细胞中的蛋白表达水平。接着采用接枝共聚法制备叶酸偶联壳聚糖纳米粒，通过将叶酸制备成叶酸活性酯，再将叶酸活性酯与壳聚糖上的氨基反应，制得叶酸偶联壳聚糖纳米粒。采用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)和核磁图谱(1H-NMR)分析叶酸与壳聚糖是否偶联成功。利用荧光分光光度计测定叶酸壳聚糖偶联物(CS(Ⅰ)-FA/CS(Ⅱ)-FA)的临界胶束浓度(CMC)。最后进行叶酸偶联壳聚糖纳米粒的载药，以TA为模型药物，以叶酸偶联壳聚糖纳米粒(CS(Ⅰ)-FA/CS(Ⅱ)-FA)为载体材料，采用自乳化溶剂挥发法和膜水化法制备TA-(CS(Ⅰ)-FA/CS(Ⅱ)-FA)载药纳米粒，利用高效液相法(HPLC)检测技术对制剂进行体外释药行为的研究。 结果:Y-79细胞中FR-α的mRNA表达水平是ARPE-19的4倍，说明癌细胞中细胞因子的基因高表达;Western blot结果表明FR-α/α-Tublin条带灰度均值及标准差在Y-79和ARPE-19细胞中分别为0.258±0.008和0.191±0.003，其中，FR-α在Y-79细胞的表达水平比ARPE-19细胞高1.35倍，两者有显著性差异(P＜0.05)。同叶酸与壳聚糖比较，叶酸偶联壳聚糖纳米粒的红外图谱特征峰发生明显变化，在1655cm-1左右和1557 cm-1左右处出现新峰，同时叶酸壳聚糖偶联物的1H核磁光谱也发生明显变化，在2.53ppm出现了新的特征峰，由此表明叶酸与壳聚糖接枝成功。经荧光分光光度计F-4600测定叶酸壳聚糖偶联物的临界胶束浓度在0.02mg/ml～1.7mg/ml之间，所以当浓度大于临界胶束浓度值时，叶酸壳聚糖偶联物将通过自组装法形成表面亲水核心疏水的纳米粒;体外研究表明，含有等量的曲安奈德(TA)的样品中，负载TA的叶酸偶联壳聚糖纳米粒显示出更好的释药性能。 结论:视网膜母细胞瘤广泛高表达叶酸受体，这为开发针对视网膜母细胞瘤的靶向药物奠定了基础。本课题成功研制了叶酸偶联壳聚糖纳米粒新型载体，所采用的制备工艺简便可行，重复性好，体外释放缓慢，为视网膜母细胞瘤的治疗提供了新思路，具有一定的创新性。